抗酸染色法是结核杆菌细菌学检查的常用方法。经典的妻—尼氏抗酸染色法操作过程较复杂, 存在以下缺点[1,2]:酒精灯加热时间长, 难以掌握染料用量, 染料容易溢出玻片, 沾污实验台或地面;加热时染液容易干涸, 须不断补加染料;染色在开放环境进行, 容易造成结核杆菌播散哭染环境。为探索简便、安全、易行的染色方法, 本文研制了可以调节染色温度和时间的恒温水浴箱观察恒温水浴加热法对结核杆菌抗酸染色效果的影响, 现将结果报道如下。
1 临床资料
1.1 一般资料
卡介苗为成都生物制品研究所产品, 萋-纳氏抗酸染色液为珠海贝索生物技术公司产品。
1.2 模拟痰标本涂片制备
将卡介苗用1mL生理盐水稀释, 充分混匀后取适量卡介苗稀释液加入到等量正常人痰液中, 混匀后涂片, 制作模拟痰标本玻片, 标本干燥后经火焰固定, 等待染色。
1.3 恒温水浴加热法抗酸染色
将固定后的模拟痰标本玻片放入自制恒温水浴箱的托盘内滴加石炭酸复红染液, 盖上托盘盖;开启恒温水浴箱电源开关, 调节温度旋钮 (设定50、60、70、80℃) 和定时旋钮 (设定5min或10min) ;温度达到设定温度后, 仪器开始自动计时, 到达设定时间后仪器报警器铃响, 关闭电源开关, 取出玻片, 加酸性酒精脱色1min, 流水冲洗后美蓝复染30s, 干燥后用显微镜油镜观察细菌染色性和形态。
2 结果
采用恒温水浴箱加热法对结核杆菌进行抗酸染色, 染色时间为10min, 染色温度分别为50、60、70℃和80℃, 染色结果见图1。图1结果显示, 70℃恒温水浴染色 (图1-C) 效果良好, 菌体形态清晰, 色泽明亮;60℃恒温水浴染色 (图1-B) 效果一般, 菌体形态可辨, 色泽偏暗;50℃和80℃恒温水浴染色 (图1-A和D) 效果差, 可辨别的菌体较少, 色泽淡染。
3 讨论
近年来, 全球结核疫情明显回升, 结核病已成为了全球关注的公共卫生与社会问题[3], 结核杆菌的细菌学检查愈加重要。结核杆菌对酸碱有较强的抵抗力, 一般染料难以进入菌体, 故结核杆菌着色困难。在染色过程中进行一定程度的加热处理, 可以协助染料进入菌体。传统加热方法采用酒精灯火焰加热, 火焰温度过高, 温度难以控制且加温过程不稳定, 染液易在玻片上干涸。
本文使用恒温水浴箱加热法对结核杆菌进行抗酸染色效果观察, 结果表明:恒温水浴加热温度70℃、染色10min时, 结核杆菌染色阳性率高, 染色鲜艳, 对比度好, 背景清晰。恒温水浴加热温度50℃、染色10min时, 菌体染色效果不明显, 可能是由于结核杆菌菌体含有大量脂质, 在较低温度条件下染料无法进入菌体细胞内。恒温水浴加热温度为80℃、染色10min时, 染色效果不明显, 可能是由于温度过高造成菌体结构被破坏。本文建立的恒温水浴箱加热法, 一方面克服了传统妻—尼氏抗酸染色法的弊端, 另一方面还能同时对多份标本涂片进行染色, 明显提高工作效率。总之, 恒温水浴箱加热抗酸染色法具有染色稳定性好、安全、环保、清洁等优点, 值得推广应用。
摘要：目的 探讨恒温水浴加热抗酸染色法能否改进结核分枝杆菌染色效果。方法 采用自制恒温水浴箱对含有卡介苗的模拟痰标本涂片进行加热染色, 调节加热温度和时间, 通过显微镜观察比较染色效果差别。结果 70℃恒温水浴染色10min, 结核杆菌菌体形态清晰, 色泽明亮, 染色效果良好。结论 改良后的恒温水浴加热抗酸染色法, 能够精确控制染色温度和时间, 染色效果良好, 同时还能减少环境污染, 值得推广。
关键词：恒温水浴,抗酸染色,结核杆菌
参考文献
[1] Lumb R, Bastion I, Carter R, et al.Tuberculosis in Australia:bacte-riologically confirmed cases and drug resistance[J].Commun Dis Intel, 2009, 33 (3) :298～303.
[2] 张卓然.临床微生物学和微生物检验[M].北京:人民卫生出版社, 2003:215.
[3] 张建芳, 段艳, 苏明权.结核分枝杆菌临床分离株耐药特点分析[J].西北国防医学杂志, 2004, 25 (3) :195～196.