论文题目：磷酸特地唑胺原料药杂质制备方法及分析方法研究
摘要：磷酸特地唑胺（Tedizolid Phosphate）化学名为（R）-3-（4-（2-（2-甲基四唑-5-基）吡啶-5-基）-3-氟苯基）-5-羟甲基噁唑烷-2-酮二氢磷酸酯,商品名为Sivextro,由Cubist制药公司研发于2014年6月获FDA批准上市。其作用机制与其他噁唑烷酮类抗生素相似,通过与50S亚基的23S核糖体RNA（rRNA）结合,阻止70S起始复合物的形成,从而抑制蛋白质合成。可以通过口服和注射两种给药途径治疗由革兰氏阳性菌引起的急性细菌性皮肤和皮肤结构感染。头痛头晕、恶心呕吐、腹泻等不良反应在临床研究中最为常见。磷酸特地唑胺作为第二个上市的噁唑烷酮类药物,具有广阔的应用前景,多见其抗菌活性、临床疗效、安全性和耐药性等方面的研究,关于其有关物质合成与测定的文献报道较少,而在药物研发过程中,杂质研究也是一项重要内容。本论文以磷酸特地唑胺原料药为研究对象,分析其合成路线中产生的杂质情况,采用定向合成结合制备液相分离纯化的方法制备出磷酸特地唑胺原料药的5种杂质,并进行结构鉴定。对这5种杂质进行标定以作为对照品,建立磷酸特地唑胺原料药有关物质的高效液相检测方法并进行方法学验证,为磷酸特地唑胺原料药的质量控制奠定基础。研究内容具体如下:一、文献综述对磷酸特地唑胺的适应症ABSSSI从定义、症状、病原体、现行治疗方法等方面进行概述。归纳总结原料药杂质制备方法及液相分析方法,为磷酸特地唑胺原料药杂质研究提供理论基础。对近年来磷酸特地唑胺的药学研究进展如合成工艺研究、杂质研究、体外活性研究以及药代动力学、安全性、耐受性研究进行全面的分析总结,为磷酸特地唑胺原料药的质量研究奠定基础。二、磷酸特地唑胺原料药杂质制备方法研究采用（5R）-3-（4-溴-3-氟苯基）-5-羟甲基噁唑烷-2-酮先于联硼酸频那醇酯在[1,1-双（二苯基膦）二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物催化下得到硼酸酯化物（5R）-3-（3-氟-4-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基）苯基）-5-羟甲基噁唑烷-2-酮,继而与5-溴-2-（2-甲基-2H-四唑-5-基）吡啶进行Suzuki偶联得到特地唑胺,在三氯氧磷作用下生成磷酸特地唑胺。根据磷酸特地唑胺的合成工艺,在其制备过程中会产生多个反应副产物。特地唑胺和三氯氧磷、三乙胺反应生成磷酸特地唑胺这一步骤中,反应生成的中间态（（R）-3-（3-氟-4-（6-（2-甲基-2H-四唑-5-基）吡啶基-3-基）苯基）-2-氧恶唑烷-5-基）甲基二氯磷酸酯可能会与特地唑胺继续反应,水解生成杂质B0201;磷酸特地唑胺会水解产生杂质A01;氯离子取代磷脂产生杂质A020501;磷酸特地唑胺在高温条件下吡啶环上的N易在空气中被氧化成杂质C01;在碱性条件下,磷酸特地唑胺会水解开环生成杂质C02。采用定向合成的方法制备这5种杂质:（5R）-3-（3-氟-4-（二羟硼基）苯基）-5-羟甲基噁唑烷-2-酮与5-溴-2-（2-甲基-2H-四唑-5-基）吡啶进行Suzuki偶联得到杂质A01;特地唑胺与氯化亚砜发生取代生成杂质A020501;特地唑胺通过缩合反应生成杂质B0201;磷酸特地唑胺用30%H2O2可氧化成杂质C01;磷酸特地唑胺在氢氧化钠溶液中开环再用盐酸酸化可得杂质C02。利用高压制备液相分别对5种杂质进行分离纯化[色谱柱:YMC ODS-AQ（50×250 mm,10 μm）;检测波长300 nm;流速60 mL/min;流动相A:20 mM甲酸铵溶液,用甲酸调pH4.5;流动相B:乙腈;线性梯度洗脱],根据峰型收集流份,HPLC[色谱柱:Sepax BR-C18（4.6×250 mm,5 μm）;检测波长 300nm;流速 1.0mL/min;柱温 30℃;流动相 A:10mM甲酸铵溶液,用甲酸调pH 4.5;流动相B:乙腈;线性梯度洗脱:0-40 min,10%B-90%B,40-50 min,90%B,50-52 min,90%-10%B,52-60 min,10%B]检测流份纯度,纯度≥95%的流份再经脱盐处理[色谱柱:YMC ODS-AQ（50×250 mm,10μm）;检测波长300 nm;流速60 mL/min;流动相A:纯化水;流动相B:乙腈;线性梯度洗脱:0-30min,10%B,30-31 min,10%B-90%B,31-51 min,90%B],HPLC 检测流份纯度,将纯度≥95%的流份于30℃减压浓缩干燥,即得杂质对照品。用HRMS、1H NMR对5种杂质分别进行结构确证,由高分辨质谱ES+中测得的分子式与分子量结合1H NMR与磷酸特地唑胺的研究背景可确定制得的杂质与对应结构相符。从性状和HPLC纯度两方面对杂质进行标定。性状即采用目测的方法,杂质纯度的测定采用的是高效液相色谱法（面积归一化法计算）,结果5种杂质均符合对照品限度要求。三、磷酸特地唑胺原料药杂质分析方法研究采用HPLC法对磷酸特地唑胺原料药的有关物质进行测定,建立的有关物质色谱条件为:色谱柱:Sepax BR-C18（4.6×250 mm,5 μm）;检测波长 300 nm;流速 1.0 mL/min;柱温30℃;流动相A:10 mM甲酸铵溶液,用甲酸调pH 4.5;流动相B:乙腈;线性梯度洗脱:0-40 min,10%B-90%B,40-50 min,90%B,50-52 min,90%-10%B,52-60 min,10%B;进样量:10 μL。进行检测波长的选择、系统适用性、专属性、耐用性、检测限和定量限、重复性、稳定性、线性等方法学验证。结果表明:在300 nm波长下进行检测较适宜,杂质C02在该波长下采用加校正因子的自身对照法进行计算;磷酸特地唑胺与各杂质分离情况良好,强制降解（酸、碱、氧化、高温、强光）条件下出现的主要降解产物与磷酸特地唑胺之间均能达到良好的分离;磷酸特地唑胺待测溶液与对照溶液室温条件24小时内稳定;磷酸特地唑胺及各杂质在0.02%～0.20%（相对于供试品溶液浓度）范围内均拥有良好的线性关系;重复性、耐用性及系统适用性均良好。对三批自制原料进行检测,结果各杂质检出量均小于0.10%,总杂最大检出量0.32%,符合要求。
关键词：磷酸特地唑胺;杂质制备;高效液相色谱法;有关物质
学科专业：药学（专业学位）
中文摘要
Abstract
中英文缩略词对照表
第一章 绪论
1. 研究背景
2. 原料药杂质制备方法及分析方法研究
3. 磷酸特地唑胺药学研究进展
4. 本文主要研究内容及意义
参考文献
第二章 磷酸特地唑胺原料药杂质制备方法研究
1. 仪器与试药
2. 杂质产生路径分析
3. 杂质的制备
4. 结构鉴定
5. 杂质标定
6. 本章小结
参考文献
第三章 磷酸特地唑胺原料药杂质分析方法研究
1. 仪器与试药
2. 方法与结果
2.1 HPLC分析条件
2.2 方法学验证
3. 本章小结
参考文献
全文总结
致谢