论文题目：全蛋液中恩诺沙星药物残留基体标准物质的研制
摘要：恩诺沙星作为第三代氟喹诺酮类药物,在人类和兽医医学中有十分广泛的应用,可用于治疗包括泌尿、呼吸道和胃肠道感染等多种疾病。但其在畜禽养殖中的不规范使用会提高病原微生物耐药性、危害人体健康以及给公共卫生安全带来威胁。因此,我国农业部颁布的235等公告中,对恩诺沙星的使用及限量做出了明确的确定,特别强调产蛋鸡禁用,并配套了相关的检测标准等,以确保农产品质量安全。恩诺沙星作为兽药残留监控计划中重要的监控参数,已列入农业部全国及地方范围内水产、畜禽等例行监测、专项监测计划中,但近年来畜禽产品风险监测结果显示,家禽等我国大宗畜禽产品中恩诺沙星等氟喹诺酮类药物仍持续有一定程度检出。因此,恩诺沙星也成为了当前我国鸡蛋等畜禽产品质量安全监控的重点。为确保监测结果的准确可靠,有效支撑政府监管工作,保证测量结果可靠性、可比性、准确性,急需研制相关纯度及基体标准物质。1.针对全蛋液中恩诺沙星基体标准物质的研究,本论文首先开展了恩诺沙星纯度标准物质的研制,以建立完整溯源链。实验通过红外光谱法和质谱法对候选物进行定性,后采用两种不同原理的方法-质量平衡法和定量核磁法对候选物进行纯度定值,后进行均匀性和稳定性的监测和考察,同时对整个纯度标准物质研制过程中的不确定度进行评估。最终获得恩诺沙星纯度标准物质量值准确,均匀性和稳定性均能达到技术要求,纯度为99.7%。扩展不确定度为0.4（k=2）,并成功申报为国家二级标准物质（GBW（E）090817）。2.本论文建立了针对基体标准物质的高准确度定值方法。以同位素标记恩诺沙星为内标,基于分散固相萃取前处理技术、结合高灵敏度三重四极质谱分析技术、建立全蛋液中恩诺沙星残留分析液相色谱-同位素稀释质谱法,准确测量鸡蛋中恩诺沙星药物残留含量。方法检出限及定量限分别为0.5μg/kg和1.5μg/kg。在0.5μg/kg～100μg/kg内线性良好,2μg/kg～20μg/kg浓度添加范围内回收率在95%-105%之间,可满足基体标准物质的定值需求。3.研制全蛋液中恩诺沙星药物残留基体标准物质。对蛋鸡通过口服连续给药5天,采集从给药的第1天至给药结束后的第9天,即14天内的鸡蛋,分析其残留消除规律。针对符合浓度水平要求的鸡蛋样品原料,通过蛋液混合-均质-封装-辐照灭菌-封装-超低温保存等制备工艺,进而获得全蛋液基体标准物质候选物。采用已建立的同位素稀释质谱法,联合多家实验室对标准物质进行定值研究。同时系统全面的研究鸡蛋基体标准物质的均匀性、稳定性等关键技术,获得研制结果如下:全蛋液中恩诺沙星药物残留基体标准物质的特性量值及其扩展不确定度（k=2）为30.6μg/kg±2.8μg/kg;长期稳定性考察结果表明,于-80℃条件下保存,基体标准物质目前满足9个月稳定。本研究的实施将为我国鸡蛋产品质量安全风险监测与评估结果的准确、可比、可溯源提供技术基础保障。
关键词：恩诺沙星;蛋液;标准物质;液相色谱-同位素稀释质谱法
学科专业：食品加工与安全（专业学位）
摘要
Abstract
第一章 引言
1.1 标准物质
1.1.1 标准物质概述
1.1.2 标准物质的研制流程
1.1.3 国内外研究现状
1.2 恩诺沙星
1.2.1 恩诺沙星的理化性质
1.2.2 氟喹诺酮类药物监管现状
1.3 氟喹诺酮类药物在鸡蛋中的残留检测技术研究现状
1.3.1 微生物法
1.3.2 免疫分析法
1.3.3 色谱分析方法
1.4 研究内容
1.4.1 恩诺沙星纯度物质的研制
1.4.2 全蛋液中恩诺沙星药物残留LC-IDMS方法的建立
1.4.3 全蛋液中恩诺沙星药物残留基体标准物质的研制
第二章 恩诺沙星纯度标准物质研制
2.1 前言
2.2 实验仪器与材料
2.2.1 实验仪器
2.2.2 试剂和材料
2.3 实验方法
2.3.1 恩诺沙星原料定性分析
2.3.2 恩诺沙星原料纯度定值
2.3.3 恩诺沙星纯度标准物质制备
2.3.4 均匀性考察
2.3.5 稳定性考察
2.4 结果与讨论
2.4.1 标准物质原料定性结果分析
2.4.2 标准物质原料定值结果-质量平衡法
2.4.3 标准物质原料定值结果-定量核磁法
2.4.4 标准物质均匀性检验结果
2.4.5 标准物质稳定性检验结果
2.5 不确定度评定
2.3.1 均匀性引入的不确定度
2.3.2 稳定性引入的不确定度
2.3.3 定值引入的不确定度
2.3.4 标准物质的合成及扩展不确定度
2.6 结果表达
第三章 蛋液中恩诺沙星同位素稀释质谱法的建立
3.1 前言
3.2 实验材料与仪器
3.3 实验部分
3.3.1 标准溶液配制
3.3.2 样品前处理方法
3.3.3 液相色谱条件及质谱条件
3.3.4 方法学判断
3.3.5 结果计算
3.4 结果与讨论
3.4.1 QuEChERS法前处理条件的优化
3.4.2 仪器方法的的优化
3.4.3 基质效应考察
3.4.4 线性考察
3.4.5 方法的检出限与定量限,准确性与精密度
3.4.6 回收率
3.5 结论
第四章 蛋液中恩诺沙星药物残留基体标准物质的研制
4.1 前言
4.2 实验材料与仪器
4.2.1 实验仪器设备
4.2.2 试剂材料
4.3 实验部分
4.3.1 基体标准物质原料的获得和制备
4.3.2 基体标准物质的均匀性检测
4.3.3 基体标准物质的稳定性检测
4.4 结果与讨论
4.4.1 目标基体及浓度的确定
4.4.2 基体标准物质定值
4.4.3 代谢规律研究
4.4.4 均质时间考察
4.4.5 均匀性检验结果
4.4.6 稳定性检验结果
4.4.7 标准物质的定值
4.5 标准物质不确定度的评估
4.5.1 标准物质定值引入的不确定度
4.5.2 均匀性引入的不确定度
4.5.3 稳定性引入的不确定度
4.5.4 标准物质的合成不确定度
4.6 结论
第五章 全文结论
5.1 恩诺沙星纯度标准物质
5.2 蛋液中恩诺沙星的液相色谱-同位素稀释质谱法的建立
5.3 蛋液中恩诺沙星基体标准物质的研制
参考文献
致谢
作者简历