IgA肾病在我国约占原发肾小球疾病的1/3, 也是导致终末期肾病的常见病因之一, 当前认为遗传因素与该病的易感性有关, 并影响疾病的发生和发展。国内学者在IgA肾病患者及其家庭成员中采用传递不平衡检验 (transmission disequili-brium test, TDT) 和单倍体相对风险 (haplotype relative risk, HRR) 分析法对megsin基因3'端非翻译区的C-2180T区的基因多态性进行分析研究后发现, C-2180T区的等位基因明显是由杂合亲代传向子代患者, 且这个等位基因共同传递的比率明显增加, 说明megsin基因的变异性与IgA肾病发生的易感性相关[1]。本文用PCR-RFLP法及基因测序法鉴定基因型, 采用病例对照研究的方法, 探讨了兰州地区汉族人群IgA肾病中C-25663G基因多态性分子遗传学意义。
1 对象与方法
1.1 对象
1.1.1 IgA肾病组
解放军第一医院心肾科经皮肾穿刺活检证实为IgA肾病的兰州地区汉族的患者44例 (男23例, 女21例) , 年龄 (10～49) 岁, 平均 (32±5) 岁。IgA肾病病理诊断标准采用2001年全国肾活检病理诊断标准[2]。均排除继发性肾脏疾病和其他合并症及并发症。
1.1.2 正常对照组
解放军第一医院100名 (男72名, 女28名) 体检正常的兰州地区汉族健康人群, 年龄 (19～46) 岁, 平均 (23±4) 岁。
1.2 基因组DNA的提取
采用QIAamp (r) DNA试剂盒从EDTA抗凝200μL外周静脉血中提取基因组DNA。
1.3 Megsin基因C-25663G基因鉴定
应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性 (poly-merase chain react ion-restrict ion fragment length polymorphism, PCR-RFLP) 方法做基因型鉴定。上下游引物分别为5'-GCT CAG ATA CAA TGG TGG CATA-3'和5'-GCT GAC ATT TGA GAG TTC CA-3' (美国生命技术公司合成) 。PCR反应条件:95°C预变性15s, 94°C变性30s, 51退火15s, 72°C延伸30s, 共35个循环, 最后72°C延伸5min。PCR反应体积为30μL。产物用限制性内切酶Hinf I (Promega公司) 37°C消化6h以上或过夜, 2%琼脂糖凝胶电泳确定基因型。
注:IgA肾病组与正常组比较, P<0.01
1.4 统计学处理
统计学分析经遗传平衡检测证明, IgA肾病患者与对照组均符合Hardy-Weinberg平衡, 具有群体代表性。应用SPSS 13.0统计软件进行分析。所有统计分析中, P<0.05认为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 Megsin基因C-25663G基因鉴定
酶切后, 等位基因CC型产生200、117bp2条片段;CG型产生317、200、117bp3条片段;GG型产生317bp1条片段, 见图1。
2.2 Megsin基因C-25663G基因多态性检测结果
基因分布CC型者28例, CG型者12例, GG型者4例, 等位基因C型68例, G型20例, 与正常对照组基因分布相比, 均无统计学意义 (P<0.01) , 见表1。
3 讨论
我们以往的研究发现, Megsin基因3'端非翻译区C-2093T和C-2180T多态性与中国汉族人群IgA肾病的发生显著相关[3]。国内学者应用PCR-RFLP方法鉴定IgA肾病患者基因型, 用以家庭为基础的传递不平衡检验 (TDT) 、单倍型相对危险度 (HRR) 分析结合病例对照研究方法, 首先分析Megsin基因C-25663G多态性与我国汉族人群IgA肾病发生的关系, 结果显示, Megsin基因C-25663G多态性与中国汉族人群IgA肾病的发生及病情进展无关[4]。但由于基因多态性研究多受人群、地域、标本量、研究方法等多方面影响, 单一的研究结果无明显的参考价值。
本研究用PCR-RFLP法鉴定基因型, 采用病例对照研究的方法, 探讨兰州地区汉族人群IgA肾病中C-25663G基因多态性分子遗传学意义。研究结果显示, IgA肾病基因分布CC型者28例 (63.63%) , CG型者12例 (27.27%) , GG型者4例 (9.09%) , 等位基因C型68例 (77.27%) , T型20例 (22.73%) , 与正常对照组基因分布相比, 均无统计学意义 (P<0.01) 。研究结果提示Megsin基因C-2093T多态性与IgA肾病的发病可能无关, 此结果和夏运风教授研究结果相似, 但这个研究结果对IgA肾病的发病机制、临床用药, 以及未来基因监测和基因治疗将具有重要的指导意义。
摘要：目的 研究兰州地区汉族人群Megsin基因C-25663G多态性与IgA肾病的关系。方法 采集兰州地区汉族的IgA肾病患者44例及体检正常的兰州地区汉族健康体检人群100例作为对照组的Megsin基因C-25663G, 应用聚合酶链反应 (PCR) 进行检测和分析。结果 IgA肾病组与健康对照组的Megsin基因C-25663G多态性检测结果显示, CC基因型、CG基因型、GG基因型和C型、T型等位基因型均没有显著性差异 (P<0.01) 。结论 Megsin基因C-25663G多态性与兰州汉族人群IgA肾病的发病可能无关。
关键词：IgA肾病,Megsin基因,聚合酶链反应
参考文献
[1] Li YJ, Du Y, Li CX, et al.Family-based association study showing that immunoglobul in A nephropathy is associated with the poly-morphisms2093C and2180T in the3'untranslated region of the Megsin gene[J].J Am Soc Nephrol, 2004, 15:1739～1743.
[2] 全国肾活检病理研讨会.肾活检病理诊断标准指导意见[J].中华肾脏病志, 2001, 17:270.
[3] M iyata T, NangakuM, Su zuk iD, et al.A mesangium predominant gene, megsin, is a new serp in up regulated in IgA nephropathy[J].JC lin Invest, 1998, 102 (4) :828～836.
[4] Miyata T, Nangaku M, Suzuk iD, et al.Amesangium predominantgene, megsin, is a new serp in up regulated in IgA nephropathy[J].J Clin Invest, 1998, 102 (1) :828～836.