免疫球蛋白e范文第1篇
1 材料与方法
1.1 标本
由南通大学附属医院病理科提供80例2004年2月至2005年12月期间手术切除标本, 均为女性。其中乳腺良性肿瘤10例。原发性乳腺癌70例, 均为乳腺浸润性导管癌。原发性乳腺癌患者年龄为30～72岁, 平均50.7岁。乳腺癌病理分级I级20例, II级26例, III级24例。按国际抗癌联盟 (UICC) 提出的TNM国际分期标准, I期22例, II期28例, III期20例。无淋巴结转移39例, 淋巴结转移数目<4个的13例, ≥4个的18例。肿瘤最长径≤5cm的61例, >5cm的9例。雌激素受体 (estrogen receptor, ER) 阴性39例, 阳性31例。孕激素受体 (progesterone receptor, PR) 阴性37例, 阳性33例。术后随访到45例病人, 失访25例, 随访率64.29%, 随访截止日期2008年11月30日, 生存期的计算从手术日期到随访截止日期, 或因复发、转移而死亡的日期为止, 随访最长时间57个月, 最短时间36个月, 平均生存时间45.33个月, 随访病例3年生存率为88.89%。患者术前均未接受放疗、化疗或内分泌治疗。
1.2 试剂
鼠抗人E-cadherin即用型单克隆抗体 (MAB-0589;Clone:A42C7) , 鼠抗人BCA-225即用型单克隆抗体 (MAB-0175;Clone:CU18) , 二步法免疫组化检测试剂盒均购于福州迈新公司。
1.3 方法
按SP试剂盒操作说明书进行。石蜡切片脱蜡水化, 按要求抗原修复, 免疫组化染色, DAB显色, 苏木精复染。PBS代替一抗作阴性对照。
1.4 结果判断
E-cadherin蛋白表达以细胞膜及细胞质出现棕黄色染色颗粒为阳性, 但以细胞膜为主。BCA-225蛋白表达以细胞质出现棕黄色颗粒为阳性。每张切片选5个高倍视野 (200倍) , 按肿瘤阳性细胞率和着色强度分别进行计分: (1) 按阳性细胞百分率:0分为≤5%, 1分为6%～25%, 2分为26%～50%, 3分为51%～75%, 4分为>75%; (2) 按着色计分:分为4个等级, 0分为无着色, 1分为淡黄色, 2分为黄色, 3分为棕黄色。两者乘积0分为 (-) , 1～4分为 (+) , 5～8分为 (++) , 9～12分为 (+++) 。为临床及统计分析的目的, 将 (-) 和 (+) 归为低表达, (++) 和 (+++) 归为高表达[1]。
1.5 统计学处理
经统计分析软件STATA 7.0分析。各组数据间比较采用χ2检验和四格表确切概率法。用Spearman等级相关分析判定相关性。Kaplan-Meier法描述生存曲线、Log-rank法进行差别显著性检验、Cox比例风险回归模型作为多因素的生存分析。P<0.05认为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 E-c adherin的表达
在乳腺浸润性导管癌与良性病变组织中, E-cadherin蛋白阳性均定位于癌细胞及导管上皮细胞膜和细胞质上, 着色深浅不一, 呈片状、灶状或散在分布。E-cadherin表达在对照组与乳腺浸润性导管癌组织中的差异有统计学意义。E-cadherin蛋白表达与乳腺癌患者的ER、PR及人类表皮生长因子受体2 (human epidermal growth fac to r rec eptor 2, Her-2) 无相关性, 与临床分期、病理分级、肿瘤大小和淋巴结转移相关, 见表1。
2.2 BCA-2 25的表达
在乳腺浸润性导管癌中, BCA-225蛋白阳性主要定位于癌细胞质中, 着色深浅不一, 呈片状、灶状或散在分布。BCA-225表达在对照组与乳腺浸润性导管癌组织中的差异有统计学意义。BCA-225蛋白表达与乳腺癌患者的ER、PR、TNM分期、淋巴结转移和肿瘤大小均无相关性, 而与肿瘤病理分级及癌基因Her-2相关, 见表1。
2.3 E-cadherin与BCA-225蛋白在乳腺癌中表达的相关性
在31例BCA-225蛋白低表达组中, E-cadherin蛋白低表达17例, 高表达14例;39例BCA-225蛋白高表达组中, E-cadherin蛋白低表达25例, 高表达14例;spearman相关分析提示两者无相关性 (r=-0.03 0 7, P>0.05) 。
2.4 乳腺癌中E-cadherin和BCA-225蛋白不同表达水平对预后影响的分析
对E-cadherin和BCA-225蛋白表达情况与生存率的关系进行Kaplan-Meier生存曲线分析, 结果显示E-cadherin高表达患者的生存率明显高于低表达者, 2组比较差异有统计学意义 (χ2=6.01, P<0.05) 。而BCA-225蛋白表达情况在此分析中差异无统计学意义 (χ2=0.26, P>0.05) (图1、2) 。
注:bca225 0表示BCA-225低表达;bca225 1表示BCA-225高表达 (P>0.05)
将肿瘤病理分级、腋淋巴结状态及E-cadherin、BCA-225蛋白表达的情况共4种因素进行Cox比例风险回归多因素的生存分析, 结果显示E-cadherin蛋白表达有独立的预后意义, 风险度exp为-1.795954 (P<0.05) 。
3 讨论
E-c a d h e r i n是钙依赖性细胞间连接的细胞粘附分子, 当E-c a d h e r in活性正常时, 肿瘤细胞不易从原发灶上脱落下来, 而E-cadherin失活导致细胞间粘附作用下降和极性紊乱, 促使肿瘤转移, 即E-cadherin是一种癌侵袭、转移的抑制因子。
实验结果显示E-cadherin在乳腺良恶性肿瘤中的表达差异显著, 其表达随着TNM分期的增高、病理分级级别的增高、肿瘤增大及淋巴结转移数目的增多而下降, 单因素和多因素分析显示E-cadherin是乳腺癌患者独立的预后指标。与PARK等[2]学者的报道一致。提示E-cadherin表达缺如或下调是乳腺癌浸润性增加、转移能力增强的一个指征, 是乳腺癌重要的预后因子, 可作为筛选术后复发转移高危人群的有效指标。关于E-cadherin在乳腺癌中表达下调或缺失的机制, 有学者报道E-cadherin的基因突变, 转录和翻译异常[3～4], 可以抑制E-cadherin在乳腺癌中的正常表达, 导致乳腺癌的发生。另外, E-cadherin的甲基化、糖基化、NF的影响、雌孕激素及E-cadherin介导的黏附复合体功能异常等均可导致乳腺组织中E-cadherin的异常表达, 从而导致乳腺癌的发生。
BCA-225是乳腺癌细胞株T47 D分泌的一种糖蛋白, 分子量为225KDa, 通常乳腺腺癌表达此种蛋白。目前, 关于BCA-225的研究主要集中在该蛋白对各个系统转移或异位肿瘤的鉴别诊断上[5～6]。但关于BCA-225与乳腺癌临床病理特征的关系目前国内外少有报道。
实验结果显示BCA-225蛋白表达随着病理分级级别的增高而增加, 在癌基因Her-2阳性组中BCA-225表达高于其阴性组, 病理分级代表着肿瘤的分化程度, 是传统的预后指标, 又因为癌基因Her-2是乳腺癌患者可靠的预后指标[7], 推测BCA-225对判断患者的预后可能有一定的参考价值。但单因素和多因素分析显示BCA-225表达与乳腺癌患者术后生存状况均无相关性。
上述结果表明, E-cadherin在乳腺癌发生发展、浸润和转移过程中起重要作用, 检测E-cadherin的表达对乳腺癌患者预后的评估有重要意义, 并且可为乳腺癌患者的鉴别诊断和基因治疗提供理论根据。BCA-225作为乳腺癌患者独立的预后评价指标还尚待进一步深入探讨。
摘要：目的 探讨乳腺癌组织中E-cadherin和BCA-225蛋白表达及其与临床病理因素和预后的关系。方法 应用SP免疫组化方法检测70例原发性乳腺癌组织和10例良性乳腺病变中E-cadherin和BCA-225蛋白的表达。结果 乳腺癌组织中E-cadherin的高表达率显著低于良性乳腺疾病, 其表达与肿瘤大小、临床TNM分期、组织学分级、淋巴结转移状态密切相关 (P<0.05) , 而与雌孕激素受体状态及癌基因Her-2无关。BCA-225的高表达率显著高于良性乳腺疾病 (P<0.01) , 其表达与组织学分级及癌基因Her-2密切相关 (P<0.05) , 而与肿瘤大小、临床TNM分期、淋巴结转移、及雌孕激素受体状态无关。E-cadherin与BCA-225两者表达无相关性。Kaplan-Meier生存曲线分析显示E-cadherin高表达患者的生存状况较对应情况好, 且差异有统计学意义 (P<0.05) 。多因素Cox回归分析表明, E-cadherin蛋白为乳腺癌有效的独立的预后指标, 其风险系数exp为-1.795954, (P<0.05) 。结论 乳腺癌E-cadherin表达缺失或减少, 与肿瘤的发生发展、增殖、侵袭转移及预后密切相关, 可作为评价乳腺癌患者独立的预后指标。乳腺癌BCA-225表达上调与肿瘤的分化程度相关, 但作为乳腺癌患者独立的预后评价指标还尚待进一步深入探讨。
关键词：乳腺癌,E-cadherin,BCA-225,预后
参考文献
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