糖尿病是一种因胰岛素绝对或相对不足,或者靶细胞对胰岛素敏感性降低引起的以糖代谢紊乱为主的慢性综合性疾病,其中II型糖尿病的发生是外周胰岛素抵抗和β细胞功能缺陷共同作用的结果[1]。
盐酸二甲双胍是目前全球应用最广泛的口服降糖药之一,近年来虽然有多个新型降糖药物上市,但二甲双胍仍是全球使用量迅速增加的经典口服降糖药物。二甲双胍有良好的单独和联合治疗的疗效和安全性证据,以及心血管并发症预防等方面明确的临床资料。因此,该药已经成为全球控制糖尿病的核心药物。盐酸二甲双胍片它可使糖尿病患者血糖及糖化血红蛋白降低,能促进靶组织胰岛素受体增加,增加机体对胰岛素的敏感性,减轻胰岛素抵抗及饭后高胰岛素血症,对服用磺酰脲类降糖药无效的糖尿病病人亦有效。国内外主要糖尿病治疗指南均建议,无论对于超重还是体重正常的糖尿病患者,除非存在禁忌症或无法耐受,否则都应从一开始就使用二甲双胍治疗,且联合治疗的方案中都应包括二甲双胍,这体现了该药在糖尿病治疗领域的重要地位[2]。目前盐酸二甲双胍片在全世界多个国家都有上市,在国内盐酸二甲双胍普通片已收载于中国药典2015版第二部,属于国家基本药物的甲类品种[3]。盐酸二甲双胍片不但有降血糖作用,还可能有减轻体重和高胰岛素血症的效果。
本研究过程中,对原处方工艺进行了优化,确定采用玉米淀粉为稀释剂、低取代羟丙纤维素为崩解剂和聚维酮K90为粘合剂,采用三相搅拌制粒工艺,完成了处方和工艺研究。自制制剂和参比制剂采用不同pH的四种溶出介质进行体外相似性评价,并进行了餐前和餐后生物等效性试验,结果表明自制制剂和参比制剂具有生物等效性。
1.材料和方法
(1)仪器和试药
紫外分光光度仪,美国安捷伦公司(型号:Cary 60);溶出度仪,上海富科思公司(型号:FADT-801RC);电子天平,梅特勒公司(型号:XPE205);盐酸二甲双胍原料药:批号180101;盐酸二甲双胍片自制制剂:批号190501、 190502、190503(规格0.25g),参比制剂:日本新薬株式会社(グリコラン錠250mg),批号A801。
(2)体外评价方法
①溶出度测定条件
以水900ml为溶出介质,转速为每分钟50转,依法操作,经15分钟时,取溶出液适量,用0.45μm滤膜滤过后,精密量取续滤液1ml,置50ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。对照品溶液的制备:精密称取盐酸二甲双胍对照品约14mg,置100ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取2ml,置50ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。取对照品溶液和供试品溶液,照紫外分光光度法,以水为空白溶液,在233nm的波长处测定吸光度,计算每片的溶出量。
②溶解度测定
盐酸二甲双胍的pka值为12.4,参照《普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则》[4]的相关内容,选择pH1.0、pH2.0盐酸溶液、pH3.8、pH4.5醋酸盐溶液、pH5.8、 pH6.8、pH8.0磷酸盐溶液以及水共8种介质进行溶解度测定。取原料药各2.0g,分别加入10ml介质中,37℃±1℃振摇1小时,观察其溶解情况。
③不同介质中稳定性比较
为考察样品在溶出介质中稳定性,着重对pH1.2盐酸溶液、pH4.0醋酸盐溶液、pH6.8磷酸盐溶液以及水4种介质进行了稳定性测定。
照溶出度测定法,以各考察介质900ml为介质,转速拟定为每分钟50转,依法操作,经15分钟时取溶出液,分别于0、1、2、3、4、6和24小时,按照1.2.1项下方法进行吸光度测定。
④溶出参数确定
参考中国药典2015年版二部、日本IF资料(2016年)和日本溶出数据库收载试验方法,所使用的装置与转速均不相同,在比较二者溶出度时,应着重对溶出装置和转速进行考察。
(3)体内评价方法
以日本新薬㈱公司的盐酸二甲双胍片为参比制剂,以自制片为受试制剂。通过单中心、随机、开放、单次给药、两周期、双交叉临床研究来评价两种制剂空腹状态下的人体生物等效性。并按照国家药品监督管理局临床试验规范要求及《生物样品定量分析方法验证指导原则》[5]进行了相关的方法学验证,包括标准曲线制定、精密度和准确度试验、选择性试验、提取回收率和待测物稳定性试验等。
根据《药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则》[6]和《以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则》[7]以及参比制剂与自制制剂的药品说明书的相关内容,所有试验受试者在餐前或餐后,每个周期服药前0h及服药后15min、30min、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、4h、6h、8h、10h、12h、16h和24h分别抽取静脉血约3ml,采用LC-MS/MS法,定量检测血浆中的二甲双胍的浓度,该方法具有灵敏度高、选择性好、分析速度快和使用范围广等特点。
2.结果
(1)体外评价
①溶解度测定
盐酸二甲双胍原料在pH1.0、pH2.0盐酸溶液、pH3.8、 pH4.5醋酸盐溶液、pH5.8、pH6.8、pH8.0磷酸盐溶液以及水8种介质各介质中都呈现易溶现象,满足本次溶出度试验条件。
②在各pH介质中的稳定性
根据试验测定结果,以水为溶出介质,供试品溶液(n=6)分别放置0、1、2、3、4、6和24小时,吸光度均无明显变化,RSD小于0.4%;以磷酸盐缓冲液(pH6.8)为溶出介质,RSD小于0.4%;以醋酸盐缓冲液(pH4.0)为溶出介质,RSD小于0.3%;以盐酸溶液(pH1.2)为溶出介质,RSD小于0.5%;结果显示各pH介质供试品溶液在室温条件下,24小时内可保持稳定。
③装置的选择
取自制制剂(190501批)及参比制剂(A801批)各6片,照溶出度和释放度测定法第一法或第二法,以水900ml为溶出介质,转速初步设定为50rpm,分别经5min、10min、15min、20min、30min、45min时,取出溶出液,按照1.2.1项下方法进行吸光度测定,考察各时间点的累积溶出量。
结果在第一法与第二法条件下,自制制剂与参比制剂体外溶出行为基本一致,鉴于日本橙皮书中溶出度测定采用的是桨板法(第二法),因此优先选择该法进行测定。
④转速的考察
取自制制剂(190501批)及参比制剂(A801批)各6片,以水900ml为溶出介质,转速分别为每分钟30转、50转和75转,分别经5min、10min、15min、20min、30min、45min时,取样按照1.2.1项下方法测定吸光度,结果表明三种转速条件下自制制剂与参比制剂体外溶出行为基本一致,而溶出速率也随着转速的增加而上升,在10分钟时,三种转速下的溶出度均达到溶出平台,每分钟50转时与人体肠胃蠕动更为相近,也最具有区分力,因此溶出转速选择为每分钟50转。
⑤参比制剂和自制制剂的溶出曲线
根据溶出度试验方法学研究结果,采用自制制剂与参比制剂在0.1mol/L盐酸溶液、pH4.5醋酸盐溶液、pH6.8磷酸盐溶液以及水四种介质中进行溶出曲线对比。在四种介质中,15min时的溶出量均大于85%,根据CDE发布的《普通口服固体制剂溶出度试验技术指导原则》要求,判定自制样品和参比制剂体外溶出行为相似。
(2)体内评价
①空腹试验
受试者单次空腹口服盐酸二甲双胍片受试制剂和参比制剂的药动学参数Cmax分别为764.3±124.63ng/mL和757.5±145.33ng/mL,AUC0-t分别为4470.3±539.14h*ng/mL和4502.3±710.86h*ng/mL,AUC0-∞分别为4543.5±554.89h*ng/mL和4576.0±718.90h*ng/mL。最终采用符合方案的28例受试者的药代参数结果评价受试制剂和参比制剂等效性结果,结果显示:受试制剂/参比制剂Cmax、AUC0-t、AUC0-∞几何均数的比值分别为101.75%、100.05%、100.00%,其90%置信区间分别为97.70%～105.96%、96.76%～103.45%、96.75%～103.37%,均落在80.00%～125.00%之间,表明盐酸二甲双胍片自制制剂与参比制剂在空腹给药时生物等效。
②餐后试验
受试者单次餐后口服盐酸二甲双胍片受试制剂和参比制剂的药动学参数Cmax分别为449.7±108.59ng/mL和425.6±82.98ng/mL,AUC0-t分别为3459.7±656.77h*ng/mL和3409.4±749.79h*ng/mL,AUC0-∞分别为3532.7±666.55h*ng/mL和3491.9±770.52h*ng/mL。最终采用符合方案的29例受试者的药代参数结果评价受试制剂和参比制剂等效性结果,结果显示:受试制剂/参比制剂Cmax、AUC0-t、AUC0-∞几何均数的比值分别为104.69%、102.23%、101.96%,其90%置信区间分别为100.15%～ 109.43%、99.13%～105.42%、98.90%～105.11%,均落在80.00%～125.00%之间,表明盐酸二甲双胍片自制制剂与参比制剂在餐后给药时生物等效。
3.讨论
口服固体制剂进入体内后,首先在胃肠液中溶出才能被有效吸收并到达体循环,药物在体内的释放和吸收直接影响其药效。溶出度试验是模拟口服固体制剂在胃肠道中崩解和溶出较理想的体外试验法,也是评价和控制药品固体口服制剂质量的重要指标。然而目前药典中采用的多为一点式判断方法,不能较真实的反应实际溶出状况。同时口服固体制剂还受处方和制剂工艺等因素的影响,优化的工艺也是保证药物良好溶出的基础。通过对盐酸二甲双胍片体外溶出度试验,包括对溶出度测定条件、溶解度测定、不同介质中稳定性比较、溶出装置和转速条件的筛选,表明自制制剂与参比制剂体外溶出度具有相关性;以及与参比制剂进行了完整的临床试验,表明自制盐酸二甲双胍片与参比制剂呈现生物等效性,本次研究工作对于优化已上市固体制剂产品的处方工艺研究亦具有较大的指导意义。未来上市后的产品可采用溶出曲线来评价工艺执行和偏离程度,以保证人民用药安全和用药有效。
摘要：目的:研究盐酸二甲双胍片体外溶出度试验,并达到体内与参比制剂生物等效。方法:通过对溶出度试验方法深入研究,确定不同pH溶出介质的检测方法和要求。结果:自制制剂与参比制剂的溶出度基本一致,人体内餐前和餐后试验呈现一致性。结论:经过对自制盐酸二甲双胍片溶出度和生物等效研究,自制制剂和参比制剂具有质量和疗效一致性。
关键词：盐酸二甲双胍片,溶解度测定,制剂
参考文献
[1] 郑文巧,II型糖尿病药物治疗进展[J].哈尔滨医药,2012,32(1):56-57.
[2] 母义明,纪立农,宁光等,盐酸二甲双胍临床应用专家共识(2016年版)[J].中国糖尿病杂志,2016,24(10):871-884.
[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2015年版二部[M].北京:中国医药科技出版社,2015:1508.
[4] NMPA.普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则.
[5] NMPA.生物样品定量分析方法验证指导原则.
[6] NMPA.药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则.
[7] NMPA.以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则.[EB/OL].[2015-11-27].