论文题目：水产品中七种喹诺酮药物残留UPLC-MS/MS检测方法的建立和应用
摘要：喹诺酮（Quinolones,QNs）药物因药效好,价格低在水产品养殖过程中广泛使用,但其致病菌耐药性和某些QNs的潜在致癌性引起广泛关注。由于QNs在动物源性食品中的残留量通常很低,需要灵敏度高的检测方法来测定,因此本研究以青鱼、泥鳅和南美白对虾为实验素材,建立了青鱼、泥鳅、南美白对虾肌肉组织中七种QNs药物分别是恩诺沙星（Enrofloxacin,ENR）、环丙沙星（Ciprofloxacin,CIP）、氧氟沙星（Ofloxacin,OFL）、诺氟沙星（Norfloxacin,NOR）、洛美沙星（Lomefloxacin,LOM）、沙拉沙星（Sarafloxacin,SAR）、和培氟沙星（Pefloxacin,PEF）的多残留检测超高效液相色谱串联质谱法（UPLC-MS/MS）,为市（县）级农产品质量安全检测中心开展水产食品中QNs类药物残留测定提供参考。通过建立的方法,采样检测了某市养殖水产品中七种QNs药物残留状况,并分析了恩诺沙星和环丙沙星在泥鳅体内的残留和消除规律。主要研究内容如下:1、通过对提取溶剂的比较,净化条件的优化,色谱条件和质谱条件的优化,建立了青鱼、泥鳅、南美白对虾肌肉组织中七种QNs药物残留同时检测的方法。青鱼、泥鳅、南美白对虾肌肉组织用1%甲酸-乙腈超声提取后,经Oasis（?）Prime HLB小柱净化,采用UPLC-MS/MS测定,七种QNs均采用内标法定量。0.1%甲酸水和纯甲醇作为流动相,流速为0.3 mL/min,电喷雾-多反应监测正离子模式监测。结果表明,7种QNs药物在青鱼、泥鳅和南美白对虾中1.0μg/kg至100 μg/kg浓度范围内,线性关系良好,相关系数（R2）均高于0.998。恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、洛美沙星、沙拉沙星、培氟沙星在空白样品中添加浓度分别为0.5MRL、1.0MRL和2.0MRL时,空白青鱼样品中七种QNs的回收率分别为95.96%～104.72%、95.57%～105.08%、92.71%～99.56%、99.56%～105.31%、97.29%～100.14%、94.61%～103.05%、96.39%～102.77%,相对标准偏差（RSD）分别为 4.91～6.28、4.13～5.29、1.76～5.82、2.41～3.92、2.33～4.57、1.02～2.16、3.17～5.67,日内 RSD 分别为 2.19～6.54、2.05～4.64、0.95～4.44、3.35～6.04、0.68～3.81、2.85～5.23、3.24～6.06,日间 RSD 分别为 4.28～7.54、2.05～4.64、0.95～4.44、3.35～6.04、0.68～3.81、2.85～5.23、3.24～6.06,检测限（LOD）分别为 0.34、0.32、0.03、0.11、0.01、0.02、0.06,定量限（LOQ）分别为 0.87、0.56、0.05、0.50、0.04、0.05、0.10;空白泥鳅样品中七种QNs的回收率分别为92.35%～105.03%、92.51%～109.38%、92.31%～104.36%、96.61%～104.36%、99.86%～103.78%、98.25%～103.37%、94.36%～106.04%,相对标准偏差（RSD）分别为 3.14～3.43、3.21～4.63、2.16～5.21、1.54～3.65、0.91～3.76、2.06～4.34、1.18～6.17,日内RSD分别为4.09～6.37、4.44～6.75、3.18～5.24、1.84～4.49、2.68～6.94、3.70～5.46、1.85～4.46,日间 RSD 分别为 6.83～7.88、6.29～7.30、4.62～7.27、3.29～6.19、3.47～8.27、5.21～6.98、2.48～6.59,检测限（LOD）分别为 0.39、0.30、0.03、0.15、0.02、0.01、0.05,定量限（LOQ）分别为0.94、0.50、0.06、0.53、0.05、0.05、0.10;空白南美白对虾样品中七种QNs的回收率分别为 98.02%～103.07%、96.11%～104.39%、92.31%～99.78%、97.35%～106.76%、99.32%～105.03%、96.05%～102.09%、98.35%～106.72%,相对标准偏差（RSD）分别为 1.46～3.91、2.37～4.31、1.95～4.66、2.95～5.00、1.79～3.89、1.48～3.42、2.90～5.09,日内 RSD 分别为 3.04～5.08、3.27～4.56、1.96～7.05、4.61～7.73、3.97～6.00、0.29～5.29、3.74～8.29,日间 RSD 分别为 2.90～7.49、3.60～5.14、2.96～8.14、4.85～7.81、4.85～5.29、1.45～5.34、3.42～8.06,检测限（LOD）分别为 0.45、0.34、0.03、0.16、0.02、0.02、0.07,定量限（LOQ）分别为 1.02、0.67、0.08、0.62、0.05、0.06、0.12。该检测方法相关性好,回收率高,能够满足青鱼、泥鳅、南美白对虾肌肉中7种QNs同时确证检测,为动物源性食品中恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、洛美沙星、沙拉沙星、培氟沙星残留同时检测提供了新的检测方法。2、采样检测了某市养殖水产品中7种QNs药物残留情况。随机抽取养殖水产品218批次样品,采用第一章建立的检测方法对218批次样品中恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、沙拉沙星7种QNs进行检测,同位素内标定量,得到218批次样品中7种QNs药物残留量。218批次样品中7种QNs检出率为0～68.2%,残留量范围为0～350.0μg/kg。按水产类别看,海水鱼（16批次）检出率为25.0%,淡水鱼（118批次）检出率为26.3%,淡水虾（26批次）未检出,海水虾（57批次）检出率3.5%,淡水蟹（1批次）未检出,鱼类是检出率较高的水产类别。按检出药物看,恩诺沙星检出率为17.4%,检出范围2.06～350.0 μg/kg,环丙沙星检出率为4.1%,检出含量范围2.65～12.0μg/kg,氧氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、沙拉沙星和诺氟沙星均未检出。以儿童、青壮年、中老年三类人群做了食用该市水产品安全性评价,结果显示,儿童最大摄入量与ADI比值为21.9%,青壮年最大摄入量占与ADI比值为10.7%,中老年最大摄入量与ADI比值为9.73%,目前尚处于一个相对安全的摄入水平。3、分析恩诺沙星和环丙沙星在泥鳅体内的残留和消除规律,对检出率较高的养殖品种泥鳅提供用药指导和休药时间。在（20±2）℃水温下,以恩诺沙星和环丙沙星为目标化合物,拌料给药的方式,分析恩诺沙星和环丙沙星在泥鳅肌肉组织中残留量和消除规律。结果显示,恩诺沙星回收率在86.58%～92.36%之间,RSD在2.48～3.53之间,环丙沙星的回收率在108.92%～114.45%之间,RSD在2.17～4.55之间。方法有较高的回收率和重复性。恩诺沙星与环丙沙星在泥鳅肌肉（带皮）组织中均按照一级动力学过程消除,半衰期分别为3.51天和5.49天。根据代谢消除模型,泥鳅体内的恩诺沙星第16天残留量为102.14 μg/kg,第17天残留量为83.76 μg/kg,第27天残留量为11.52 μg/kg,第28天残留量为9.44 μg/kg;泥鳅体内的环丙沙星第14天残留量为108.13μg/kg,第15天残留量为94.47 μg/kg,第31天残留量为10.87 μg/kg,第32天残留量为9.50 μg/kg。根据农业部第235号公告中恩诺沙星和环丙沙星肌肉组织中MRL不超过100 μg/kg,得出恩诺沙星理论休药期不低于17天,环丙沙星休药期不低于15天。韩国是其泥鳅主要进口国,其对恩诺沙星和环丙沙星药物的MRL要求不超过10μg/kg,得出恩诺沙星理论休药期不低于28天,环丙沙星理论休药期不低于32天。综上所述,出口泥鳅建议合理的休药期应不低于32天。
关键词：氟喹诺酮类药物;超高效液相色谱-串联质谱法;代谢残留
学科专业：农业硕士（专业学位）
摘要
Abstract
符号说明
第1章 文献综述
1.1 喹诺酮类药物概述
1.1.1 恩诺沙星的理化特性和药物作用
1.1.2 环丙沙星的理化特性和药理作用
1.1.3 氧氟沙星的理化特性和药物作用
1.1.4 诺氟沙星的理化特性和药物作用
1.1.5 洛美沙星的理化特性和药物作用
1.1.6 沙拉沙星的理化特性和药物作用
1.1.7 培氟沙星的理化特性和药物作用
1.2 喹诺酮药物特点
1.3 喹诺酮类药物检测方法的研究
1.3.1 酶联免疫吸附法(ELISA)
1.3.2 高效毛细管电泳法(HPCE)
1.3.3 液相色谱法(HPCL/UPLC)
1.3.4 质谱法(MS)
1.4 研究目的和意义
1.4.1 研究目的
1.4.2 研究意义
第2章 水产品中七种喹诺酮药物UPLC-MS/MS法的建立
2.1 材料与方法
2.1.1 标准品、主要试剂与材料
2.1.2 实验主要仪器
2.1.3 主要溶液配制
2.1.4 实验动物与样品采集
2.1.5 样品的提取与净化
2.1.6 色谱和质谱条件
2.1.7 检测方法的考察
2.2 结果与分析
2.2.1 母离子与定性、定量离子的确定
2.2.2 样品的确证
2.2.3 标准曲线、线性范围和决定系数
2.2.4 添加回收率和精密度
2.2.5 检测限和定量限
2.3 讨论
2.3.1 UPLC-MS/MS检测参数的优化
2.3.2 样品前处理方法的优化
2.4 本章小结
第3章 某市养殖水产品中七种QNs药物残留调查和安全性评价
3.1 材料与方法
3.1.1 标准品、主要试剂与材料
3.1.2 实验主要仪器
3.1.3 主要溶剂的配置
3.1.4 实验动物与样品采集
3.1.5 样品的提取与净化
3.1.6 色谱和质谱条件
3.1.7 药物膳食摄入安全性评价
3.2 结果与分析
3.2.1 标准曲线和回收率
3.2.2 218批次水产品检测结果
3.3 讨论
3.3.1 其他地区水产品中喹诺酮药物残留现状
3.3.2 膳食摄入安全性评价
3.3.3 控制策略
3.4 本章小结
第4章 恩诺沙星和环丙沙星在泥鳅体内的残留和消除规律
4.1 材料与方法
4.1.1 标准品、主要试剂与材料
4.1.2 实验主要仪器
4.1.3 主要溶剂的配置
4.1.4 实验动物与养殖条件
4.1.5 样品的提取与净化
4.1.6 液相与质谱的条件
4.1.7 消除常数和半衰期
4.2 结果与分析
4.2.1 标准曲线、回收率和离子色谱图
4.2.2 残留代谢规律
4.3 讨论
4.4 本章小结
全文总结
参考文献
致谢