卡非佐米, 是一种蛋白酶体抑制剂, 适用为治疗多发性骨髓瘤患者。用于治疗预先接受过至少2种药物治疗, 并有证据显示在完成末次治疗后60天内疾病恶化的难治性多发性骨髓瘤。本文采用高效液相色谱法测定卡非佐米的含量, 该方法简单、快捷、重复性较好。
1仪器与试药
Agilent1260型高效液相色谱仪及其色谱工作站, 紫外检测器检测 (VWD) 。卡非佐米工作对照品 (重庆泰濠制药) , 卡非佐米样品 ( 重庆泰濠制药:CAR~1412001、CAR~1412002、CAR~ 1412003) , 乙腈 (色谱纯) , 磷酸氢二钾 (分析纯) , 纯化水。
2. 方法与结果
2.1色谱条件
Agilent的Extend~C18反相色谱柱 (4.6mm×250mm, 5μm) , 以乙腈~0.01mol/L磷酸二氢钾缓冲液 (p H=6.0) (65:35) 为流动相, 流速为1.0 m L/min , 用紫外检测器检测, 检测波长210nm, 柱温30℃。
2.2溶液的制备
2.2.1对照品溶液的配制:精密称取卡非佐米工作对照品25mg, 置25ml容量瓶中, 加乙腈溶解并稀释至刻度。
2.2.2供试品溶液的配制:精密称取卡非佐米供试品25mg, 置25ml容量瓶中, 加乙腈溶解并稀释至刻度。
2.3系统适用性试验
精密量取上述对照品溶液进样, 卡非佐米的出峰时间在36min左右, 理论板数在5000以上, 拖尾因子为1.02, 卡非佐米与相邻杂质色谱峰的分离度大于1.5;对照品溶液连续进样5次, 卡非佐米峰面积的RSD为0.24%, 符合中国药典的要求。
2.4线性范围
精密称取卡非佐米对照品25 mg, 置25m L量瓶中, 加乙腈溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为卡非佐米对照储备液。精密量取上述储备液配制卡非佐米工作对照品系列溶液, 浓度分别为1.2、1.1、1.0、0.9、0.8、0.14μg/m L。精密量取对照品系列溶液10μL, 进样测定, 以浓度X对峰面积 (y) 线性回归, 得到卡非佐米标准曲线方程为:Y=21.416X+0.037 (r=0.99948) 。这表明卡非佐米在0.14~1.2μg/m L峰面积和浓度呈现良好的线性关系。
2.5重复性试验
精密称取卡非佐米 (批号为CAR~1412003) 25mg (7份) , 置25m L量瓶中, 加乙腈溶解并稀释至刻度, 摇匀, 按上述色谱条件进样测定, 外标法计算含量, 结果RSD为0.83% (n7) 。
2.6准确度试验
精密称取已经确定含量的卡非佐米工作对照品, 测定卡非佐米工作对照品在浓度为0.8mg/ml、1.0mg/ml、1.2mg/ml时, 对照品中的卡非佐米含量, 每份浓度配制三份样品, 计算含量测定的准确度和回收率。九份样品测定得回收率平均值为99.8%, 含量的RSD为0.22%。
3讨论
3.1本色谱方法中, 用前充分平衡色谱柱以及柱温的选择是有效分离的关键。Extend~C18反相色谱柱使用前需用流动相 (水:乙腈=80:20) 冲洗, 使用后同样用该流动相冲洗色谱柱, 否则会出现色谱系统压力过高, 卡非佐米与杂质不能完全分离。
3.2本研究中, 对比了不同浓度的磷酸盐缓冲液和不同p H值的磷酸盐缓冲液, 结果发现0.01mol/L磷酸二氢钾缓冲液调节p H为6.0时, 对卡非佐米和杂质的出峰情况效果最好。通过对卡非佐米溶液进行紫外扫描, 发现卡非佐米的最大吸收波长为210nm, 因此色谱方法中的波长定为210nm。
4结语
本文建立了优化的卡非佐米含量测定的HPLC法, 并对该方法进行了完整的方法学验证。通过以上试验结果表明, 所建方法系统适用性、线性范围、准确度和重复性均符合要求, 能够准确地对卡非佐米进行含量测定的分析, 可为卡非佐米质量控制和质量标准的建立提供可靠手段。
摘要：目的:建立原料药卡非佐米有关物质及含量测定的HPLC法。方法:用Agilent的ExtendC18反相色谱柱 (4.6mm×250mm, 5μm) , 以乙腈0.01mol/L磷酸二氢钾缓冲液 (p H=6.0) (65:35) 为流动相, 流速为1.0 m L/min, 用紫外检测器检测, 检测波长210nm, 柱温30℃。结果卡非佐米在0.141.2μg/m L呈良好的线性关系 (r=0.99948) , 重复性RSD为0.83% (n=7) , 卡非佐米的平均回收率为99.9%, RSD为0.22% (n=9) 。结论 方法快速、简便, 结果准确、可靠, 可用于卡非佐米的含量测定。
关键词：卡非佐米,高效液相色谱法,含量
参考文献
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