细胞工程范文第1篇
摘要：通过对基因工程，细胞工程，微生物工程的介绍，分别讲叙其中的发展情况与技术问题。最后总结细胞工程制药的进展。 关键词:细胞工程，制药
Research Progress in the Production of
Cell-derived Drugs Abstract:Through genetic engineering, cell engineering, microbial engineering introduction, water respectively the development situation and technical problems. Most live summarizes cell engineering pharmaceutical progress. Keywords: cell engineering，pharmacy 1.引言: 细胞工程制药包括植物工程制药，动物工程制药以及微生物工程制药。随着细胞培养、基因工程等生物技术的发展，近年来细胞工程制药有了较快的进展。细胞工程制药解决了许多药物的短缺问题，并且按人们的意愿产生了许多人工难以合成的药物，对于疾病诊断，预防和治疗方面起到重要作用。同时，生物技术目前也已被广泛应用于食品、化学、农业及环保等领域，为这些行业带来了一场新的技术革命。
当前细胞工程所涉及的主要技术领域包括细胞融合技术、细胞器特别是细胞核移植技术、染色体改造技术、转基因动植物技术和细胞大量培养技术等方面。这些技术的发展对细胞工程制药有着巨大的推动作用。 2.基因工程
近十几年来，在利用生物技术制取新药方ICI取得了惊人成就，己有不少药物应用于临床。如人胰岛素、人生长激素、干扰素、乙肝疫苗、人促红细胞生 成素. GM一集落刺激因子(GM一CSF、组织溶纤酶原激活素、白细胞介素-2及白介素一11等。正在研究的有降钙素基因相关因子、肿瘤坏死因子、表皮生长因子等140多种[1]。
2.2应用基因工程技术建立新药的筛选模型在新药研究开发中日益广泛使用的各种酶、受体筛选模型所需的靶酶和受体往往来自动物体内，因而数量有限而不利于进行大量筛选。将一些靶酶的活性中心或受体的配体、亚基等在微生物中大量表达可以解决这一难题。 3细胞工程
细胞工程是在细胞水平上的生物工程。人们认识到培养的动、植物细胞可以通过无性繁殖扩大群体数景同时保持木身遗传性状一致。通过细胞融合技术发展起来的单克隆抗体技术取得了重大成就，该技术被誉为免疫学中的“革命”。 3.1单克隆抗体技术单克隆抗体技术是将能在体外无限繁殖的恶性瘤细胞与能产生单一抗体的B淋巴细胞融合，使融合细胞具有两种亲木细胞特性的技术。单克隆抗体最受重视的用途是在肿瘤诊断和治疗方ICI的应用。经抗体与药物结合制成“生物导弹”，能定位杀灭瘤细胞避免或减少对止常细胞的伤害，从而大大减轻了抗癌药物的副作用。目前，以单克隆抗体为基础的诊断和治疗试剂在全球的销售额己超过40亿美元[1]。
3. 2植物细胞培养生产次生代谢产物利用特殊设计适于植物细胞培养的发酵罐，培养经过细胞系筛选，条件优化的植物细胞，可获得有经济价值的次生代谢产物，它们常常是药物[3]。次生代谢产物的低产现象是制约细胞培养法生产植物人然产物技术产业化应用的核心问题之一，与初生代谢相比，植物次生代谢产物的合成具有更加复杂的调控机制，并且更易受外界因素的影响[4]。
我们最近的研究结果表明，在桔青霉细胞壁诱泞子处理约2h后，红显杉悬浮细胞中NO开始增加并在6h左右时达到最高，随后出现下降，表明真菌诱,可以诱发红显杉细胞中NO的生物合成[5]。
3. 3动物细胞培养目前，动物细胞培养主要用于通过大量的细胞培养获得细胞产品。同时可用来进行病毒抗原的制作和疫苗的生产，如制作带状疤疹、水痘、传染性肝炎等疫苗。它的应用大大减少了用于疾病预防、治疗和诊断的试验动物，为生产疫苗、细胞囚子、生物产品乃至人造组织等产品提供了强有力的工具[6]。
动物细胞的大规模高效培养技术是生物制药的关键技术.通过动物细胞培养生产生物产品已成为全球生物工业的主要支住.目前动物细胞培养生产较多的生物制剂是蛋白和抗体，通常采用中国仓鼠的卵巢细胞，事先将能产生某种蛋白质药品的基因片段与仓鼠卵巢细胞的DNA融合.再在培养液中大量培养它们、最后得到所需药品。与微生物发酵法比，虽然产量相对较低。但设备费用节省得多，如属于小品种、小产品类生物工程产品.可采用此法[7,8]。 4微生物工程
微生物工程也称发酵工程，它在原有发酵技术的基础上又采用了新技术使工艺水平大大提高。所采用的新技术主要应用于3个方面工艺改进、新药研制和菌种改造。工艺改进主要依赖于计算机理论及技术的发展。新药研制则得益于医学研究中对疾病机理的深入了解。菌种改造主要利用基因工程原理及技术[9,10]。止是由于采用其它学科的理论和新技术成果，使得微生物工程成为一高新技术。现代发酵工程不但生产酒精类饮料、醋酸和ICI包，而且生产胰岛素、干扰素、生长激素、抗生素和疫苗等[11]多种医疗保健药物。 5结束语
细胞工程的快速发展有赖于其他生物技术的发展，它们相互促进相互影响。细胞工程在制药方面已经取得了许多惊人的成果，解决了生物药的短缺问题。同时也产生了很大的经济效益。但目前细胞制药工程人面临这许多的问题，其中大规模细胞制药任然是一些生物药生产的一大瓶颈。未来将实验室小生产转变为工业化大生产，将是细胞工程技术的一大飞跃。 【参考文献】
[1]沈子龙，廖建民，徐寒梅.转基因动物技术与转基因动物制药[J].中国药科人学学报，2002,33(2):81一86. [2]赵玉平，杨夏，高峰丽. 植物细胞制药的研究进展[J]. 中国中医药现代远程教育, 2012,10 (12)
[3]成静，郭勇.植物细胞工程药物生产的研究进展[J].江西科学, 2000,18(1) [4]徐茂军.一氧化氮:植物细胞次生代谢信号转导网络可能的关键点的点[J].自然利一学进展，2007,17(12):1622 [5]徐茂军，菊芳，朱睦兀，NO参与真菌诱导子对红豆杉恳浮细胞中PAL 活化和紫杉醇生物合成的促进作用[J]科学通报，2004,8(49):667-672 [6]滑静，杨柳，张淑萍，上虹.生物工程制药研究进展[J].中国畜牧兽医,2006, 33 (10) [7]马瑞丽.动物细胞工程制药的研究进展[J]. 科技资讯,2007(14) [8]米力，陈志南.动物细胞人规模培养生产蛋自的工艺选择.中国生物工程杂志,2003,23(7):1. [9]周亚风，张先恩.分子酶工程学研究进展.生物工程学报，2002,18(4):401-406. [10]李红艳，徐梅.向青等.空间诱变致生长减慢CHO(dhfr一)细胞株的特性，中
细胞工程范文第2篇
细胞工程：是应用细胞生物学和分子生物学方法，借助工程学的实验方法或技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性和生物学特征，以获得特定的细胞、细胞产品或新生物体有关理论和技术方法的学科。 ★第一章：
细胞全能性：一个生活细胞所具有得产生完整生物个体的潜在能力。(作为植物组织或器官的基本单位细胞，在离题培养条件下，实现分裂和分化并能发育成胚胎和完整植株的能力)
细胞分化：导致细胞形成不同结构，引起功能改变或潜在发育方式改变的过程。
脱分化：培养条件下使一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或分生细胞状态的过程。
再分化：当细胞脱分化以后，无序生长的细胞及其愈伤组织要重新进入有序生长才能再生为个体的过程。
按细胞分裂能力植物细胞可分为3类：第一类始终保持分裂能力：茎尖、根尖及形成层细胞。第二类分化终端细胞，永远失去分裂能力：筛管、导管、气孔保卫细胞等特化细胞。第三类暂不分裂细胞(G0细胞)在受到外界刺激后可重新启动分裂：表皮细胞及各种薄壁细胞。 离体培养中器官发生的方式：先芽后根、先根后芽、愈伤组织的不同部位形成芽和根，在通过维管组织的联系形成完整植株。
器官分化过程：第一阶段外植体经过诱导形成愈伤组织。第二阶段是“生长中心”(即分生组织，愈伤组织中形成器官的部位)形成。第三阶段器官原基及器官形成(生长中心部位形成不同的器官原基，进而分化出相应的组织和器官)。
体细胞胚：离题培养下没有经过受精过程，但经过了胚胎发育过程所形成的胚的类似物。
体细胞胚形成的途径：1直接途径就是从外植体某些部位直接诱导分化出体细胞胚，如：直接从子叶基部的表皮细胞或切口处产生体细胞胚。
2、间接途径是在固体培养中外植体先形成愈伤组织，再分化发育产生体细胞胚;悬浮培养中先产生胚性细胞团再形成体细胞胚。 与器官发生形成个体的途径相比，体细胞胚发育再生植株的特点：一是体细胞胚具有双极性，二是体细胞胚形成后与母体的维管束系统联系较少，即出现生殖隔离现象。
体细胞胚的特点：
1、起源于非合子细胞
2、双极性细胞能同时允许根芽发生
3、存在生殖隔离
4、经历类似合子胚发育的各种胚共四个发育阶段
5、遗传稳定变异相对较小
6、由性细胞发育而来 ★第二章;
离体培养条件下遗传变异的特点：普遍性、局限性、嵌合性、生理适应性。
影响体细胞遗传与变异的因素：1供体植物(原有的倍性水平在培养细胞多倍化过程中起着重要作用)2培养基及培养方式(培养方式、激素以及其他附加成分均会诱导体细胞变异的发生)3继代培养的次数(继代时间越长继代次数愈多细胞变异的概率就越高)。 ★第三章：
实验室的组成：基本实验室，辅助实验室，实验室布局。其中基本实验室分为准备室(进行一切与实验有关的准备工作)接种室(进行材料的离体无菌操作)培养室(对离体材料进行控制条件下的培养)。辅助实验室又分细胞学实验室和生化分析实验室。
基本设备配置：常规设备(天平、冰箱、酸度计、离心机、加热器、纯水器、分装设备)、灭菌设备(高压蒸汽灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒装置、紫外灯)、无菌操作设备(净化工作台、接种箱)、培养设备(培养架、培养箱、摇床、生物反应器)、其他设备。 灭菌技术：培养基灭菌(高压蒸汽灭菌或过滤灭菌)玻璃器皿灭菌(湿热和干热灭菌)金属用具灭菌(使用前干热灭菌使用中浸泡在70%的酒精中，再以火焰将酒精烧去，冷却)操作环境灭菌(气体熏蒸或紫外线照射)
培养基成分：无机盐类、有机化合物、生长调节物质、水、其他附加成分。
外植体：指用于离体培养的活的植物组织，器官等材料。
外植体的来源有三种：生长在自然环境下的植物、有目的地培养在温室控制条件下的生长的植物、无菌环境下已经经过离体培养的植物。 培养基组成：
1、无机盐类：大量元素、微量元素;
2、有机化合物：糖类、维生素、肌醇、腺嘌呤、氨基酸、其他复合成分;
3、生长调节物质：生长素类、细胞分裂素类、赤霉素类;
4、水;
5、其他附加成分：琼脂、活性炭。
外植体灭菌选择：
1、种子灭菌;
2、芽，叶片，茎等组织材料灭菌;
3、未成熟胚，子房，及花药灭菌。注意：灭菌后的材料应立即接种培养，否则会造成二次污染。 ★第四章：
快速繁殖：利用细胞的再生特性，在组织培养条件下加速繁殖材料的个体生产提高繁殖系数
植物脱毒和快繁的意义：1能够有效保持优良品种特性2生产无病毒种苗，防止品种退化3快速繁殖新品种，加速优良品种推广4节约耕地，提高农产品商品产出率5便于运输
离体繁殖：在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖的技术。
立体繁殖的一般技术环节：1无菌培养物的建立2培养物的增殖3器官分化4植株的形成和移栽
培养基的增殖方式：芽增殖，不定芽增殖，胚状体的增殖，愈伤组织增殖。
增值方式的选择：首先选择茎芽增殖，其次是不定芽，除非万不得已不宜选择愈伤组织增值方式。
花药培养：把发育到一定阶段的花药接种到人工培养基上，使其发育和分化成为植株的过程。
花粉培养：从花粉中分离出花粉粒使之成为分散的或游离的状态，通过培养使花粉粒脱分化进而发育成完整植株的过程。 共同点：利用花粉染色体、单倍体性培养发育
不同点：1.花粉培养可以避免花药壁花丝和药隔等体细胞组织的干扰能更好地调节控制雄核发育的各种因子;2.花粉数量大具有单细胞单倍性和较高同步性等特点，可以从较少的花药获得大量的花粉植物，3.花粉培养还能为研究细胞分化条件胚胎发生和形态发生机理提供较为理想的实验系统，4花药培养的成功为深入展开原生质体的培养遗传操作和发育分子生物学的研究提供了有用的材料和良好的技术基础。
单培体培养的特点;1体细胞染色体数目减半;生长发育弱，体型小，各种器官明显减小;2各种器官明显减少;3雌雄配子严重败育，有的甚至不能进入有性世代。
单培应用潜力:1迅速获得纯和性材料，缩短育种年限2获得育种中间材料3与诱变育种结合可提高诱变率4作为遗传工程受体更有效5与体细胞融合6用作基础研究的各个领域。
胚培养的意义:1克服杂交育种中杂种胚的早期夭折2克服珠心胚的干扰，提高育种效率3理论研究的意义，胚培养可用于探讨植物器官发生过程的许多问题，研究胚发育中胚乳的作用和进行胚胎切割实验等。 胚培养类型:成熟胚培养和幼胚培养。
幼胚培养的生长发育方式：1胚胎发育2早熟萌发3愈伤组织 胚乳发育类型：核型 细胞型 沼生目型 ★第五章
植物细胞培养：在离体条件下对植物单个细胞或小的细胞团进行培养使其增殖的技术。
细胞悬浮培养：将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。
用于建立细胞悬浮培养的愈伤组织要求：有较好的松散型，使之在悬浮培养的起始阶段易打散;还必须必备较强的增殖和再生能力。 满足细胞悬浮培养体系的三条件：1悬浮培养物分散性良好，细胞团较小一般在30到50个细胞以下;2均一性好，细胞形状和细胞团大小大致相同，悬浮系外观为大小均一的小颗粒，培养基清澈透亮，细胞色泽呈鲜艳的乳白或淡黄色;3细胞生长迅速，悬浮细胞的生长量一般2到3天甚至更短时间可增加一倍。
悬浮细胞培养的同步化:同一悬浮培养体系中的所有细胞都同时通过细胞周期的某一特定时期。
同步化方法：分选法，饥额法，抑制剂法，低温处理法。
单细胞培养方式:微室培养，看护培养，平板培养，其他单细胞培养技术。
生物反应器类型：搅拌式，气动式，固定化细胞。 悬浮细胞的生长动态(S曲线)：延迟期、指数生长期、直线生长期、减缓期、静止期。当细胞生长进入减缓期时，就要及时继代。 ★第六章
原生质体：除去细胞壁后的裸露的球形细胞。
原生质体的特点：虽然没有了细胞壁，但仍能进行植物细胞的各种基本生命活动，如蛋白质和核酸的合成、光合作用、呼吸作用以及通过质膜的物质交换等。
原生质体纯化方法：
1、沉降法;优点是搜集方法方便，操作简单，原生质体丢失少。但这种方法在漂洗过程中易造成原生质的损害且纯度不够好，常存在少量脱壁不完全的细胞和破碎的原生质体。
2、飘浮法;优点是可收集较纯净的原生质，还可避免在离心纯化过程中因震荡撞击或挤压引起的原生质损伤或破裂，所用试剂简单，成本低，从而造成原生质体的获得率较低。缺点是原生质在数量上损失较多。
3、梯度离心法：优点：获得原生质体更为纯净。 原生质活力测定原理：
方法:荧光素双醋酸酯染色法(FDA)，酚藏花红染色法，荧光增白剂染色法(CFW)，伊凡蓝染色法。
原生质的应用：1原生质由于脱去了细胞壁并且在离体培养条件下能够实现细胞的全能性而且再生植株，可以作为一个良好的试验系统而用于细胞壁的形成与功能，质膜的结构与功能，细胞骨架细胞分化与脱分化等基础理论问题的研究。2原生质体容易摄取外缘DNA、染色体、细菌、细胞器和质粒等，从而为高等植物细胞水平和分子水平的遗传操作提供理想的实验体系。3原生质体还可应用于体细胞杂交，无性系变异及突变体的筛选，细胞器的分离等研究。4原生质体可以作为植物生理学，分子生物学，遗传学，病毒学，育种学，体细胞遗传学和实验生物学等学科的理论和应用研究提供重要的实验体系。5作为遗传转化的受体。 ★第七章
植物体细胞杂交:又称原生质体融合将植物不同属种甚至科间的原生质体通过人工方法诱导融合，然后进行离体培养，使其再生杂种植株的技术。
融合方法：
1、PGE诱导融合方法，优点是融合成本低，不需特殊设备;融合子产生的异核率较高，融合过程不受物种限制。缺点是融合过程繁琐，PEG可能对细胞有毒害作用。
2、电融合法：优点是不存在对细胞的毒害问题，融合效率高，融合技术操作简便。缺点是仪器昂贵，给融合技术的实际应用带来一定的限制。 ★第八章
人工种子的概念：任何一种人工种皮包被或裸露的具有形成完整植株能力的繁殖体。 人工种子的分类：(根据包被的需要程度分)
1、裸露或休眠的繁殖体。
2、被人工种皮包被的繁殖体。
3、水凝胶包埋在包被的人工种皮的繁殖体。(根据繁殖体的类型分)1体细胞人工种子2非体细胞人工种子 人工种子的特点：一 重要的经济作物、粮食作物以及多年生经济林木的人工种子报道日益增多。二 是以微器官为繁殖体的报道呈增加趋势，其中包括微芽、微枝、原球茎、小鳞茎和小块茎等。 人工种子组成的三个部分：繁殖体、人工胚乳和人工种皮。 ★第九章
玻璃化:是指液体转化为非晶体的固化过程。
玻璃化法：是将生物材料经极高密度的玻璃化溶液快速脱水后直接投入液氮，使生物材料连同玻璃化溶液发生玻璃化转变，进入玻璃态。 玻璃化的途径：1 大幅度提高冷却速率 2 增加溶液浓度 影响超低温保存效果的因素：植物的基因型 抗冻性及器官、组织和细胞的年龄及生理状态。
冰冻保护剂的特点：易溶于水，对细胞无毒，容易从组织细胞中清除。 冰冻保护剂的类型：渗透型冰冻保护剂、非渗透型冰冻保护剂。 第十章
植物基因转化受体系统：用于转化的外植体通过组织培养途径及其它非组织培养途径，能高效、稳定的再生无性系，并能接受外源基因的整合，对用于转化选择的抗生素敏感的再生系统。 植物基因转化受体系统的类型：1 经过愈伤组织的受体系统 2 不经过愈伤组织的受体系统 3 原生质体在生系统 4 细胞系及其体细胞胚受体系统 5 生殖细胞受体系统。 ★论述题：
植物细胞工程的应用：
1、在植物育种上的应用：将常规植物育种技术与植物组织培养技术相结合，可以获得常规技术难以获得或无法获得的种质材料。(快速获得特殊倍性材料、克服远源杂交不亲和、克服杂种胚早期夭折、导入外援基因、突变体筛选、种质资源保存)
2、种苗脱病毒与快速繁殖：利用茎尖培养脱毒，在组织培养条件下或在具有良好的病毒传播隔离条件下进行无病毒种苗的快速繁殖;利用组织培养技术，亦使许多传统上繁殖系数很低的有性繁殖植物得以快速繁殖，大大提高了经济效益。
3、细胞培养生产有用次生产物：植物几乎能生产人类所需要的一切天然有机化合物，如：蛋白质、脂肪、糖类、天然药物、香料、生物碱及其它活性物质。4在植物生物学和发育生物学研究中的应用：植物不同组织、细胞培养获得再生个体，及其在此过程中所形成的调控技术本身，进一步揭示里植物细胞全能性学说的本质和内涵，是对细胞生物学领域的重要贡献。
5、在植物遗传、生理生化以及植物病理等基础研究中心的应用：利用细胞途径进行染色体操作，可以有目的地创造植物附加系，代换系，易位系为染色体工程的研究开辟新途径;细胞培养和组织培养为研究植物生理活动提供了理想技术体系;在人工培养条件下对植物抗病性进行研究，免除了环境条件的干扰，使得结果更加真实可靠。 人工种子的应用前景：
1、微器官人工种子可能最先用于无性繁殖植物：微器官如微芽、试管块茎和试管鳞茎等作为繁殖体时，成苗率高且出苗整齐，具有田间应用的可行性，同时，在立体培养中，可采用脱毒技术首先出去病毒后再进行人工种子生产，可大大提高无性繁殖植物种子的质量，避免天然种苗引起的病害传播。
二、人工种子可用于天然种子繁殖后代群体变异大的植物：不定芽试管苗繁殖体技术已在生产上显示了树体整齐的优越性，以微芽为繁殖体的人工种子技术已经建立，可大大降低生产成本，减少运输损耗。
细胞工程范文第3篇
细胞工程：是应用细胞生物学和分子生物学方法，借助工程学的实验方法或技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性和生物学特征，以获得特定的细胞、细胞产品或新生物体有关理论和技术方法的学科。 ★第一章：
细胞全能性：一个生活细胞所具有得产生完整生物个体的潜在能力。(作为植物组织或器官的基本单位细胞，在离题培养条件下，实现分裂和分化并能发育成胚胎和完整植株的能力)
细胞分化：导致细胞形成不同结构，引起功能改变或潜在发育方式改变的过程。
脱分化：培养条件下使一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或分生细胞状态的过程。
再分化：当细胞脱分化以后，无序生长的细胞及其愈伤组织要重新进入有序生长才能再生为个体的过程。
按细胞分裂能力植物细胞可分为3类：第一类始终保持分裂能力：茎尖、根尖及形成层细胞。第二类分化终端细胞，永远失去分裂能力：筛管、导管、气孔保卫细胞等特化细胞。第三类暂不分裂细胞(G0细胞)在受到外界刺激后可重新启动分裂：表皮细胞及各种薄壁细胞。 离体培养中器官发生的方式：先芽后根、先根后芽、愈伤组织的不同部位形成芽和根，在通过维管组织的联系形成完整植株。
器官分化过程：第一阶段外植体经过诱导形成愈伤组织。第二阶段是“生长中心”(即分生组织，愈伤组织中形成器官的部位)形成。第三阶段器官原基及器官形成(生长中心部位形成不同的器官原基，进而分化出相应的组织和器官)。
体细胞胚：离题培养下没有经过受精过程，但经过了胚胎发育过程所形成的胚的类似物。
体细胞胚形成的途径：1直接途径就是从外植体某些部位直接诱导分化出体细胞胚，如：直接从子叶基部的表皮细胞或切口处产生体细胞胚。
2、间接途径是在固体培养中外植体先形成愈伤组织，再分化发育产生体细胞胚;悬浮培养中先产生胚性细胞团再形成体细胞胚。 与器官发生形成个体的途径相比，体细胞胚发育再生植株的特点：一是体细胞胚具有双极性，二是体细胞胚形成后与母体的维管束系统联系较少，即出现生殖隔离现象。
体细胞胚的特点：
1、起源于非合子细胞
2、双极性细胞能同时允许根芽发生
3、存在生殖隔离
4、经历类似合子胚发育的各种胚共四个发育阶段
5、遗传稳定变异相对较小
6、由性细胞发育而来 ★第二章;
离体培养条件下遗传变异的特点：普遍性、局限性、嵌合性、生理适应性。
影响体细胞遗传与变异的因素：1供体植物(原有的倍性水平在培养细胞多倍化过程中起着重要作用)2培养基及培养方式(培养方式、激素以及其他附加成分均会诱导体细胞变异的发生)3继代培养的次数(继代时间越长继代次数愈多细胞变异的概率就越高)。 ★第三章：
实验室的组成：基本实验室，辅助实验室，实验室布局。其中基本实验室分为准备室(进行一切与实验有关的准备工作)接种室(进行材料的离体无菌操作)培养室(对离体材料进行控制条件下的培养)。辅助实验室又分细胞学实验室和生化分析实验室。
基本设备配置：常规设备(天平、冰箱、酸度计、离心机、加热器、纯水器、分装设备)、灭菌设备(高压蒸汽灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒装置、紫外灯)、无菌操作设备(净化工作台、接种箱)、培养设备(培养架、培养箱、摇床、生物反应器)、其他设备。 灭菌技术：培养基灭菌(高压蒸汽灭菌或过滤灭菌)玻璃器皿灭菌(湿热和干热灭菌)金属用具灭菌(使用前干热灭菌使用中浸泡在70%的酒精中，再以火焰将酒精烧去，冷却)操作环境灭菌(气体熏蒸或紫外线照射)
培养基成分：无机盐类、有机化合物、生长调节物质、水、其他附加成分。
外植体：指用于离体培养的活的植物组织，器官等材料。
外植体的来源有三种：生长在自然环境下的植物、有目的地培养在温室控制条件下的生长的植物、无菌环境下已经经过离体培养的植物。 培养基组成：
1、无机盐类：大量元素、微量元素;
2、有机化合物：糖类、维生素、肌醇、腺嘌呤、氨基酸、其他复合成分;
3、生长调节物质：生长素类、细胞分裂素类、赤霉素类;
4、水;
5、其他附加成分：琼脂、活性炭。
外植体灭菌选择：
1、种子灭菌;
2、芽，叶片，茎等组织材料灭菌;
3、未成熟胚，子房，及花药灭菌。注意：灭菌后的材料应立即接种培养，否则会造成二次污染。 ★第四章：
快速繁殖：利用细胞的再生特性，在组织培养条件下加速繁殖材料的个体生产提高繁殖系数
植物脱毒和快繁的意义：1能够有效保持优良品种特性2生产无病毒种苗，防止品种退化3快速繁殖新品种，加速优良品种推广4节约耕地，提高农产品商品产出率5便于运输
离体繁殖：在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖的技术。
立体繁殖的一般技术环节：1无菌培养物的建立2培养物的增殖3器官分化4植株的形成和移栽
培养基的增殖方式：芽增殖，不定芽增殖，胚状体的增殖，愈伤组织增殖。
增值方式的选择：首先选择茎芽增殖，其次是不定芽，除非万不得已不宜选择愈伤组织增值方式。
花药培养：把发育到一定阶段的花药接种到人工培养基上，使其发育和分化成为植株的过程。
花粉培养：从花粉中分离出花粉粒使之成为分散的或游离的状态，通过培养使花粉粒脱分化进而发育成完整植株的过程。 共同点：利用花粉染色体、单倍体性培养发育
不同点：1.花粉培养可以避免花药壁花丝和药隔等体细胞组织的干扰能更好地调节控制雄核发育的各种因子;2.花粉数量大具有单细胞单倍性和较高同步性等特点，可以从较少的花药获得大量的花粉植物，3.花粉培养还能为研究细胞分化条件胚胎发生和形态发生机理提供较为理想的实验系统，4花药培养的成功为深入展开原生质体的培养遗传操作和发育分子生物学的研究提供了有用的材料和良好的技术基础。
单培体培养的特点;1体细胞染色体数目减半;生长发育弱，体型小，各种器官明显减小;2各种器官明显减少;3雌雄配子严重败育，有的甚至不能进入有性世代。
单培应用潜力:1迅速获得纯和性材料，缩短育种年限2获得育种中间材料3与诱变育种结合可提高诱变率4作为遗传工程受体更有效5与体细胞融合6用作基础研究的各个领域。
胚培养的意义:1克服杂交育种中杂种胚的早期夭折2克服珠心胚的干扰，提高育种效率3理论研究的意义，胚培养可用于探讨植物器官发生过程的许多问题，研究胚发育中胚乳的作用和进行胚胎切割实验等。 胚培养类型:成熟胚培养和幼胚培养。
幼胚培养的生长发育方式：1胚胎发育2早熟萌发3愈伤组织 胚乳发育类型：核型 细胞型 沼生目型 ★第五章
植物细胞培养：在离体条件下对植物单个细胞或小的细胞团进行培养使其增殖的技术。
细胞悬浮培养：将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。
用于建立细胞悬浮培养的愈伤组织要求：有较好的松散型，使之在悬浮培养的起始阶段易打散;还必须必备较强的增殖和再生能力。 满足细胞悬浮培养体系的三条件：1悬浮培养物分散性良好，细胞团较小一般在30到50个细胞以下;2均一性好，细胞形状和细胞团大小大致相同，悬浮系外观为大小均一的小颗粒，培养基清澈透亮，细胞色泽呈鲜艳的乳白或淡黄色;3细胞生长迅速，悬浮细胞的生长量一般2到3天甚至更短时间可增加一倍。
悬浮细胞培养的同步化:同一悬浮培养体系中的所有细胞都同时通过细胞周期的某一特定时期。
同步化方法：分选法，饥额法，抑制剂法，低温处理法。
单细胞培养方式:微室培养，看护培养，平板培养，其他单细胞培养技术。
生物反应器类型：搅拌式，气动式，固定化细胞。 悬浮细胞的生长动态(S曲线)：延迟期、指数生长期、直线生长期、减缓期、静止期。当细胞生长进入减缓期时，就要及时继代。 ★第六章
原生质体：除去细胞壁后的裸露的球形细胞。
原生质体的特点：虽然没有了细胞壁，但仍能进行植物细胞的各种基本生命活动，如蛋白质和核酸的合成、光合作用、呼吸作用以及通过质膜的物质交换等。
原生质体纯化方法：
1、沉降法;优点是搜集方法方便，操作简单，原生质体丢失少。但这种方法在漂洗过程中易造成原生质的损害且纯度不够好，常存在少量脱壁不完全的细胞和破碎的原生质体。
2、飘浮法;优点是可收集较纯净的原生质，还可避免在离心纯化过程中因震荡撞击或挤压引起的原生质损伤或破裂，所用试剂简单，成本低，从而造成原生质体的获得率较低。缺点是原生质在数量上损失较多。
3、梯度离心法：优点：获得原生质体更为纯净。 原生质活力测定原理：
方法:荧光素双醋酸酯染色法(FDA)，酚藏花红染色法，荧光增白剂染色法(CFW)，伊凡蓝染色法。
原生质的应用：1原生质由于脱去了细胞壁并且在离体培养条件下能够实现细胞的全能性而且再生植株，可以作为一个良好的试验系统而用于细胞壁的形成与功能，质膜的结构与功能，细胞骨架细胞分化与脱分化等基础理论问题的研究。2原生质体容易摄取外缘DNA、染色体、细菌、细胞器和质粒等，从而为高等植物细胞水平和分子水平的遗传操作提供理想的实验体系。3原生质体还可应用于体细胞杂交，无性系变异及突变体的筛选，细胞器的分离等研究。4原生质体可以作为植物生理学，分子生物学，遗传学，病毒学，育种学，体细胞遗传学和实验生物学等学科的理论和应用研究提供重要的实验体系。5作为遗传转化的受体。 ★第七章
植物体细胞杂交:又称原生质体融合将植物不同属种甚至科间的原生质体通过人工方法诱导融合，然后进行离体培养，使其再生杂种植株的技术。
融合方法：
1、PGE诱导融合方法，优点是融合成本低，不需特殊设备;融合子产生的异核率较高，融合过程不受物种限制。缺点是融合过程繁琐，PEG可能对细胞有毒害作用。
2、电融合法：优点是不存在对细胞的毒害问题，融合效率高，融合技术操作简便。缺点是仪器昂贵，给融合技术的实际应用带来一定的限制。 ★第八章
人工种子的概念：任何一种人工种皮包被或裸露的具有形成完整植株能力的繁殖体。 人工种子的分类：(根据包被的需要程度分)
1、裸露或休眠的繁殖体。
2、被人工种皮包被的繁殖体。
3、水凝胶包埋在包被的人工种皮的繁殖体。(根据繁殖体的类型分)1体细胞人工种子2非体细胞人工种子 人工种子的特点：一 重要的经济作物、粮食作物以及多年生经济林木的人工种子报道日益增多。二 是以微器官为繁殖体的报道呈增加趋势，其中包括微芽、微枝、原球茎、小鳞茎和小块茎等。 人工种子组成的三个部分：繁殖体、人工胚乳和人工种皮。 ★第九章
玻璃化:是指液体转化为非晶体的固化过程。
玻璃化法：是将生物材料经极高密度的玻璃化溶液快速脱水后直接投入液氮，使生物材料连同玻璃化溶液发生玻璃化转变，进入玻璃态。 玻璃化的途径：1 大幅度提高冷却速率 2 增加溶液浓度 影响超低温保存效果的因素：植物的基因型 抗冻性及器官、组织和细胞的年龄及生理状态。
冰冻保护剂的特点：易溶于水，对细胞无毒，容易从组织细胞中清除。 冰冻保护剂的类型：渗透型冰冻保护剂、非渗透型冰冻保护剂。 第十章
植物基因转化受体系统：用于转化的外植体通过组织培养途径及其它非组织培养途径，能高效、稳定的再生无性系，并能接受外源基因的整合，对用于转化选择的抗生素敏感的再生系统。 植物基因转化受体系统的类型：1 经过愈伤组织的受体系统 2 不经过愈伤组织的受体系统 3 原生质体在生系统 4 细胞系及其体细胞胚受体系统 5 生殖细胞受体系统。 ★论述题：
植物细胞工程的应用：
1、在植物育种上的应用：将常规植物育种技术与植物组织培养技术相结合，可以获得常规技术难以获得或无法获得的种质材料。(快速获得特殊倍性材料、克服远源杂交不亲和、克服杂种胚早期夭折、导入外援基因、突变体筛选、种质资源保存)
2、种苗脱病毒与快速繁殖：利用茎尖培养脱毒，在组织培养条件下或在具有良好的病毒传播隔离条件下进行无病毒种苗的快速繁殖;利用组织培养技术，亦使许多传统上繁殖系数很低的有性繁殖植物得以快速繁殖，大大提高了经济效益。
3、细胞培养生产有用次生产物：植物几乎能生产人类所需要的一切天然有机化合物，如：蛋白质、脂肪、糖类、天然药物、香料、生物碱及其它活性物质。4在植物生物学和发育生物学研究中的应用：植物不同组织、细胞培养获得再生个体，及其在此过程中所形成的调控技术本身，进一步揭示里植物细胞全能性学说的本质和内涵，是对细胞生物学领域的重要贡献。
5、在植物遗传、生理生化以及植物病理等基础研究中心的应用：利用细胞途径进行染色体操作，可以有目的地创造植物附加系，代换系，易位系为染色体工程的研究开辟新途径;细胞培养和组织培养为研究植物生理活动提供了理想技术体系;在人工培养条件下对植物抗病性进行研究，免除了环境条件的干扰，使得结果更加真实可靠。 人工种子的应用前景：
1、微器官人工种子可能最先用于无性繁殖植物：微器官如微芽、试管块茎和试管鳞茎等作为繁殖体时，成苗率高且出苗整齐，具有田间应用的可行性，同时，在立体培养中，可采用脱毒技术首先出去病毒后再进行人工种子生产，可大大提高无性繁殖植物种子的质量，避免天然种苗引起的病害传播。
二、人工种子可用于天然种子繁殖后代群体变异大的植物：不定芽试管苗繁殖体技术已在生产上显示了树体整齐的优越性，以微芽为繁殖体的人工种子技术已经建立，可大大降低生产成本，减少运输损耗。
细胞工程范文第4篇
1, 细胞工程：是应用细胞生物学和分子生物学方法，借助工程学的实验方法或技术，在细胞水
平上研究改造生物遗传特性和生物学特性，以获得特定的细胞、细胞产品或新生物体的有关理论和技术方法的学科。广义的细胞工程包括所有的生物组织、器官及细胞离体操作和培养技术。狭义的细胞工程是指细胞融合和细胞培养技术。
根据研究对象的不同，高等生物的细胞工程分为动物细胞工程和植物细胞工程。动物细胞工程包括细胞培养技术(包括组织培养、器官培养)，细胞融合技术，胚胎工程技术(核移植、胚胎分割等)，克隆技术(单细胞系克隆、器官克隆和个体克隆)。植物细胞工程包括植物组织、器官培养技术，细胞培养技术，原生质体融合与培养技术，亚细胞水平的操作技术等。
2, 植物细胞工程：以植物组织细胞为基本单位，在离体条件下进行培养、繁殖或人为的精细操 作，使细胞得某些生物学特性按人们的意愿发生改变，从而改良品种或创造新物种，或加速繁殖植物个体，或获得有用物质的过程称… 植物细胞工程的应用：
1， 利用细胞融合技术，克服远缘杂交不亲和性。 2， 利用培养变异，筛选优良的突变体。 3， 倍性育种，缩短育种年限。
4, 离体种质保存。 5,
细胞培养生产有用的物质。 第二章
一， 实验室设置及内部设备
实验室建设应考虑的问题：
1、实验的性质
2、实验室的规模
细胞工程实验室: 基本实验室:准备室、无菌操作室、培养室 贮藏室 辅助实验室：细胞学实验室、生化分析实验室 温室
1、准备室
完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、 配制、培养基分装及高压灭菌;器皿、材料的洗涤等工作。
主要设备
纯水器 工作台 药品厨 天平 电磁炉 冰箱 玻璃器皿 酸度计 高压灭菌锅 干燥箱等
2、无菌操作室 (接种室)
用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。
接种室应用推拉门，设有缓冲间，面积2m2为宜。进入接种室前更衣换鞋，减少带入接种室杂菌。
接种室主要设备
超净工作台 ：每次实验前要用紫外灯灭菌20min，关掉紫外灯开始工作，工作过程中注意一直开着吹风机。
无菌操作用具： 离心机 细胞融合仪
3、培养室
用于接种材料的培养。培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。 控制：温度、光照、湿度。
培养室主要设备：培养架 空调 时控器 自动开灯、关灯温度自动记录仪 摇床 二 ，培养基
1，培养基的种类
1 培养基根据其态相不同分为固体培养基与液体培养基。根据培养物的培养过程，培养基分为初代培养基和继代培养基。根据作用不同，培养基为诱导培养基、增殖培养基和生根培养基。 根据营养水平不同，培养基分为许多种,常用如下： (1) MS培养基：富盐平衡培养基(还有LS、BL、ER)
特点: ①无机盐浓度较高，元素比例合适，是较稳定的平衡溶液;②微量元素种类齐全; ③营养丰富 。
(2)B5培养基 ：高硝态氮培养基(还有N6和SH培养基)
特点: ①硝酸钾含量高; ②氨态氮含量低; ③ VB1含量较高。 (3)N6培养基：高硝态氮培养基
特点：硝态氮含量高，氨态氮含量较低。
(4)White培养基：低盐培养基(还有WS、HE、改良Nitsch等 特点：无机盐含量低，有机成分也很低，适于生根培养。 (5)KM-8P培养基：
特点:有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素，广泛用于原生质融合的培养。 培养基成分：水 无机盐 有机成分 植物激素 培养物支持材料 辅助性物质 2，植物激素的应用规律
①先Aux后CKs处理,有利于细胞分裂但不利于细胞分化。容易产生多倍体细胞(核分裂和胞壁形成不同步所至)， cks有利于胞壁形成。
②先CKs 后Aux处理，细胞分裂也分化(可能是内源生长素起作用) ③ Aux 和CKs 同时处理，分化率提高。 Aux与CKs的比值改变形态建成的方向。
高 有利根分化，抑制芽形成; Aux / CKs 适中 促进愈伤组织生长;
低 有利芽分化，抑制根形成;
在组织培养中生长调节物质的使用浓度，因植物的种类、部位、时期、内源激素等的不同而异, 培养基配制：
1、确定配方
2、移母液
3、定容
4、称蔗糖
5、调PH值(用0.1MNaOH或HCl调PH值为5.8)
6、培养基熬制(加琼脂)
7、分装(100ml的三角瓶约装入30-40ml, 30瓶/L)
8、扎口
9、灭菌
10、接种 三，植物材料灭菌
灭菌方法 ①.培养基灭菌：高压湿热灭菌，某些激素采用过滤灭菌
②.玻璃器皿灭菌：干热灭菌：150℃ 40min;120℃ 2h，湿热灭菌：121℃, 30min 接种前用酒精棉球擦试，并在酒精灯火焰上灼烧灭菌。
③.接种工具灭菌：用前干热灭菌，用前湿热灭菌，接种前用酒精棉球擦试，浸入95%酒精液中，并在酒精灯火焰上灼烧灭菌。 电热石英砂灭菌器 ④.实验服、口罩灭菌：湿热灭菌
⑤.接种室灭菌 ：紫外灯照射(接种室、超净台)：波长260nm，距离小于1.2m，15-20min。臭氧灭菌机：1-2h,熏蒸灭菌：(5-8ml甲醛+5g高锰酸钾)/ m3 ,接种台喷雾消毒：75%酒精。 ⑥.培养室灭菌 : 新建培养室用前要彻底熏蒸1次。
隔1周用洗衣粉水或来苏水拖地1次，用高锰酸钾擦架1次。
⑦.物体表面灭菌: 灭菌方式：喷雾、涂抹杀菌 ,范围：超净台的台面和四壁、双手 消毒剂：70%酒精;1-2%来苏水;1%新洁尔灭等。
⑧.接种材料消毒: A, 取材 营养器官：根、茎尖、茎段、叶片等
生殖器官：胚胎(胚、胚珠、胚乳等)和花药 等
外植体〔explant〕：从植物体上分离下来的用于离体培养的材料 外植体灭菌
用化学灭菌剂灭菌
2 消毒步骤：①流水冲洗或洗衣粉漂洗②用化学灭菌剂浸润消毒通常：70%酒精30S，0.1%升汞4-10min。表面有较厚蜡质层的的可加吐温-20或吐温-80等浸润剂(灭菌液的0.5%)。 ③无菌水冲洗3-5次。注：灭菌液要浸没材料 第三章 植物细胞全能性与形态发生
一、植物细胞全能性(totipotency)：植物体每个正常细胞都含有该植物的全部遗传信息，在适宜的条件下如同受精卵一样, 具有发育成完整植株的潜在能力。
细胞分化〔cell differentiation〕指由于细胞分工而导致细胞形成不同结构，引起功能改变或潜在发育方式改变的过程。 细胞脱分化〔cell dedifferentiation〕培养条件下使一个已分化的细胞失去已分化细胞的典型特征，或消除了细胞分工，使之回复到分生细胞状态或胚性细胞状态的过程。或具有特异结构和功能的细胞转化成没有特异结构和功能的细胞的过程。
愈伤组织〔callus〕植物离体培养过程中脱分化后的细胞，经过细胞分裂，产生的无组织结构、无明显极性、松散的细胞团称为愈伤组织。多在外植体切面上产生。
愈伤组织的特征：细胞分裂快，结构疏散，缺少有组织的结构，颜色浅而透明。成功地脱分化将导致细胞分裂，形成愈伤组织或胚性细胞团。
植物胚胎干细胞：植物连续的器官分化是由顶端分生组织细胞发育而成，因此，植物顶端分生组织细胞具有较强的表达全能性的能力，被称为植物胚胎干细胞。
生理脱离效应;当细胞或组织脱离母体以后，在适宜的条件下将进行一些特殊的发育方式，如再生、复壮等，child将其称为生理脱离效应
(细胞)或(组织)与母体分离和激素的调控是细胞全能性表达的前提。 在离体培养条件下，细胞全能性的表达是通过细胞脱分化和再分化实现的。脱分化是细胞全能性的表达前提，再分化是细胞全能性的表达最终体现。
静止细胞(G0细胞)启动分裂是分化细胞成功脱分化的重要标志。
细胞脱分化的三个阶段 ：1，启动阶段 细胞质增生并开始向细胞中央伸出细胞质丝，液泡蛋白出现。 2，演变阶段 细胞核向中央移动，质体转变为原质体 3，脱分化终结期，回复到分生组织。
细胞再分化〔redifferentiatio〕脱分化后无序生长的分生细胞在离体培养下，重新恢复细胞分化能力，经过细胞分化、组织分化和器官分化递进地进行，最后再生完整植株。
极性(polarity)：植物的器官、组织、甚至单个细胞在不同的轴向上存在的某种形态结构以及生理生化上的梯度差异。细胞的不均等分裂是细胞极性建立的标志(即细胞分化的标志)。 激素在植物生长发育中具有重要的调控作用，也是离体培养条件下，调控细胞脱分化和再分化的主要因素。其中生长素和细胞分裂素是两类主要的调控培养条件下细胞生长和分化的植物激素。
在离体培养条件下TEs则由愈伤组织薄壁细胞分化形成这是愈伤组织细胞分化器官的前提。 植物的离体器官发生：培养条件下的组织或细胞团(愈伤组织)分化形成不定根、不定芽等器官的过程。
离体培养中器官发生的方式
通过器官发生形成再生植株大体上有3种方式：
①先芽后根:是应该选择的方式.②先根后芽 ③根芽同长 植物细胞经再分化形成植株有2条途径：(在离体培养条件下)器官发生 体细胞胚胎发生 体细胞胚(胚状体、体胚)：指离体培养下没有经过受精过程，但经过了胚胎发育过程所形成的胚的类似物。
胚状体有以下几方面的界定：
①体细胞胚是离体培养的产物，只限于在离体培养范围使用，以区别于无融合生殖胚;②体 3 细胞胚起源于非合子细胞，以区别于合子胚;③体细胞胚经过了胚胎发育过程，以区别与离体培中器官发生形成个体的途径。
经过愈伤组织的胚胎发生需要3个培养阶段： ①诱导外植体形成愈伤组织;②诱导愈伤组织胚性化 ，③体细胞胚形成。 体细胞胚的结构与发育特点
1、与器官发生途径相比，体细胞胚在组织学上有3个特征： ①体细胞胚最根本的特征是具有双极性，即在发育的早期阶段从方向相反的两端分化出茎端和根端，而不定芽或不定根都是单极性的;
②体细胞胚的维管组织与外植体现存组织无解剖结构上的联系，而不定根或不定芽与外植体或愈伤组织的维管组织有联系。
③体细胞胚胎的维管组织分布是独立的Y字形结构，不定芽维管组织无此结构。 人工种子：(狭义)植物离体培养中产生的体细胞胚，包裹在含有养分和具有保护功能的物质中，并在适宜条件下能够发芽出苗的颗粒体。
(广义)在体细胞胚、微型营养变态器官、不定芽等微繁体之外加上必要的营养成分后，用具有一定通透性而无毒的材料将其包裹起来，形成的与天然种子相似的颗粒体。 第四章 离体培养下的遗传与变异
离体培养中的遗传与变异特点：
1、普遍性：变异可发生在各种培养类型中; 变异发生在各种植物的培养中;变异发生与培养类型有关。
2、局限性：一些单基因控制的性状不仅发生隐形突变，也发生显性突变。
3、嵌合性：是指同一有机体中同时存在有遗传组成不同的细胞它是组织培养中常见的现象。 体细胞变异诱导材料的选择：其一，目标性状的可行性。体细胞突变的频率虽然较高，但对于某一个体来讲，变异的性状是个别的，因此选择综合性状良好的植物品种材料，通过诱变改变个别不良性状，是体细胞突变系选择的目的。其二，必需充分考虑试验植物的细胞培养技术水平，只有对起始材料有良好的培养技术，才有可能制定完满的诱变及选择方案。如果起始细胞的培养技术不成熟，不能再生整株，则不能进行后续的各项操作。 其三，适当的细胞类型亦是提高体细胞突变系筛选效率的重要条件。 第五章植物主要的组织培养技术 第一节快繁
无性繁殖途径：
1、无融合生殖：即不经过减数分裂和受精而形成种子。
2、营养繁殖：即由母株的营养体部分再生出新的植株 植物离体快速无性繁殖：利用离体培养技术,用优良植株的外植体进行培养,在短期内获得大量遗传一致的个体的方法，这种离体无性繁殖方法由于繁殖速度快，又称离体快速无性繁殖。所获得的株群称单株无性系或单芽无性系
初代培养 ：芽、茎段、叶片等外植体在离体培养条件下诱导愈伤组织、侧芽或不定芽、胚状体过程。即接种某种外植体后，最初的几代培养。
生根培养：将芽苗转接到生根培养基上培养成为完整植株的过程 植物快繁常见问题及对策：
(一)污染的原因及预防：原因：细菌、真菌为病源菌;污染途径有外植体带菌，培养基及器皿灭菌不彻底，操作人员未遵守操作规程，环境不清洁。 预防措施：(1)防止材料带菌：避免阴雨天在室外采集外植体;春秋组培;材料预培养。(2)严格外植体灭菌(3)接种用具灭菌彻底(4)严守无菌操作规程(5)保持培养室清洁
(二)褐变的原因及预防原因(1)植物品种(基因型)(2)生理状态(3)培养条件(4)材料转接季节 防止措施(1)选择适宜的外植体(2)连续转接3)先液体培养再固体培养(4)加抗氧化剂(5)选择合适的培养条件加活性炭或 暗处培养。
(三)玻璃化的原因及预防原因：
(1)激素浓度(尤其CTK)高(2)琼脂浓度低(3)光照弱(4)温度高(5)通风条件不好(6)培养基离子种类及比例不适宜 预防措施：(1)适当控制培养基中无机盐成分，适当提高蔗糖和琼脂浓度，减少含氮化合物的用量，降低培养基的水势。(2)适当降低CTK的浓度。考虑加入适当的脱落酸。(3)增加自然光照;增加容器通气，控制温度。(4)加入活性炭、多效唑或CCC等物质。 第二节、植物脱毒快繁技术 1热处理脱毒原理：
①病毒是DNA大分子，病毒进入植物细胞后，随植物细胞DNA一起复制。热处理并不能杀死细胞，只是钝化病毒的活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，而失去病毒的侵染能力。
②热处理是一种物理效应，可加速植物细胞分裂，在激烈分裂的细胞中正常核蛋白合成占优势，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。因此加速分生组织细胞的分裂，能够获得无病毒植株。
2、热处理脱毒方法：(1)温汤浸渍处理 适用于休眠器官，在50℃左右的温水中浸渍10min至数小时，方法简便易行，但易使材料受伤。(2)热空气处理 热空气处理对活跃生长的茎尖效果较好。将生长的盆栽植株移入温热治疗箱内(35-40℃)处理时间因植物而异，短则几十分钟，长可达数月。
分生组织不带病毒，可能有4方面的原因：
1、植物体病毒的移动主要靠2条途径：一是通过维管系统，而分生组织中尚未形成维管系统;二是通过胞间连丝，但这条途径病毒移动速度非常慢，赶不上茎尖和根尖细胞不断分裂和活跃的生长速度。
2、当植物细胞分裂DNA复制时，病毒DNA随着复制。因此，植物细胞分裂和病毒繁殖之间存在相互竞争。在旺盛分裂的分生组织中，代谢活动很高，正常核蛋白合成占优势，使病毒无法进行复制。
3、茎尖中存在高水平内源激素，可抑制病毒的增殖。
4、在植物体内存在有一种“病毒钝化系统”，在分生组织中的活性最高，因而使分生组织不受侵染。
第三节 花药和花粉的培养
花药培养:将花粉发育至一定阶段的花药培养在人工培养基上，诱导其花粉粒改变发育进程，形成花粉胚或愈伤组织，进而分化成苗的过程。(器官培养) 花粉培养(小孢子培养)：将发育至一定阶段花粉从花药中分离出来成为分散或游离状态，花粉脱分化后再生成苗。(细胞培养)
单倍体：具有配子体染色体数的孢子体。
单倍体植物3个明显特点：
1、体细胞染色体数减半
2、生长发育弱，体形小
3、雌雄配子严重不育
花药、花粉培养的意义
1、迅速获得纯合型材料，提高选择效率，缩短育种年限
2、获得育种中间材料
3、突变体选育
4、体细胞融合
5、遗传研究
6、获得染色体异附加系和代换系
7、遗传工程受体 花粉植株再生途径：
1、经由成愈伤组织再生植株
2、经由胚状体再生植株 花粉分离收集：
由于花粉包于花药内，必须将它们从花药中分离、收集才能进行培养。方法： 1)花粉漂浮自然释放法:将花药接种于液体培养中，使花粉自然释放。 2)人工挤压法:用玻璃棒捣碎花药使花粉释放。
5 3)机械法:用磁力搅拌器打碎花药释放花粉。
释放的花粉粒→ 尼龙网(孔径20—60um)过滤，除去药壁等组织 → 500-1000转/分离心1-5分钟，收集花粉。
花药培养过程中花药为什么要经过低温处理 低温处理的作用机理：
1)预处理引起花药、花粉内源激素发生变化，改变了小孢子(花粉粒)第一次有丝分裂的轴向发育(正常发育时，两次有丝分裂形成三核花粉粒)，进而形成愈伤组织或胚状体。 2)提高小孢子的生活力，延缓退化速度，而提高了诱导率。
3)引起小孢子孤立化，即小孢子从花药中分离。因为低温处理过程中，花药内薄壁细胞和绒毡层逐渐退化，从而切断与小孢子之间的联系。 花药培养时为什么要用较高浓度蔗糖和较低浓度激素?
蔗糖浓度 培养基中蔗糖浓度比其它组织培养高，尤其早期培养，一般5%—10%原因是花粉母细胞的渗透压比花丝等体细胞高，即高浓度的蔗糖不利于药壁、花丝等体细胞的生长，而利于花粉的生长。
激素 花药壁分化程度高，重新分裂需要较高的激素浓度才能启动。因此，花药培养基的激素水平要相对较低才能抑制二倍体细胞的分裂。确定适宜的激素浓度，以促使花粉细胞分裂的同时又抑制花药二倍体细胞分裂是成功获得单倍体的关键。 第四节 胚胎培养
胚胎培养类型 胚培养 胚乳培养 子房培养 胚珠培养
胚培养概念：无菌条件下，把胚从种子、子房或胚珠中分离出来，在培养基上进一步生长发育形成幼苗的过程。
成熟胚培养：是指子叶已形成的种胚。仅提供一定的温度、湿度就可以发芽生成植物体。如种子的发育
成熟胚培养意义：克服发芽障碍;打破种子休眠，缩短育种周期等。 幼胚培养：胚龄处于原胚期、球形胚、心形期、早鱼雷期的培养。
幼胚培养意义：
1、克服远缘杂交不育
2、克服珠心胚干扰，提高育种效率
3、幼胚具有较高再生能力，可通过体细胞胚胎发生产生大量的再生植株。
4、为原生质体培养、细胞融合及基因转化提供试验材料。 幼胚培养时胚的发育方式有哪几种?各有何特点?
① 胚性发育：幼胚的离体培养，仍按在活体内的发育方式发育，最后形成成熟胚，然后再按种子萌发途径出苗形成完整植株，这种途径发育的幼胚一般一个幼胚将来就是一个植株
② 早熟萌发：离体胚不继续胚性生长，而是在培养基上迅速萌发成幼苗，通常称为早熟萌发。在大多数情况下，一个幼胚萌发成一个植株，但有时会由于细胞分裂产生大量的胚性细胞，以后形成许多胚状体，从而可以形成许多植株，这种现象就是所谓的丛生胚现象。
③愈伤组织：在许多情况下，幼胚的离体培养首先发生细胞增殖，形成愈伤组织。一般来讲由胚形成的愈伤组织大多为胚性愈伤组织，这种胚性愈伤组织很容易分化形成植株。 胚乳按发育初期是否形成细胞壁分为①核型胚乳②细胞型胚乳③沼生目型胚乳 试管受精：培养未受精的胚珠或子房并在试管内撒播花粉，使其受精形成具有生活力的种子。 未授粉胚珠子房培养与授粉后胚珠子房培养有何不同?
根据培养的胚珠是否受精将胚珠培养分为受精胚珠的培养和未受精的胚珠的培养。(1)未受精的胚珠的培养,目的是为试管受精提供雌配子体。(2)受精后胚珠的培养,胚珠内胚的发育处于早期阶段,从两个细胞的原胚开始至球形胚阶段。
6 第六章 植物细胞培养及次生产物代谢生产
植物细胞培养：是指在离体条件下对植物单个细胞或小的细胞团进行培养使其 增殖的技术. 培养方法：培养规模:小规模培养 大批量培养
培养方式:悬浮培养 平板培养 看护培养 产物不同:诱变培养 次生产物培养
培养方式：悬浮培养、单细胞培养、植物细胞的规模化培养及有用物质生产
悬浮培养(cell suspension culture)悬浮培养是细胞培养的基本方法，是将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基进行培养增殖的技术。
成功的悬浮细胞培养体系必须满足3个条件：
1、浮悬培养物分散性良好，细胞团较小，一般在30～50个细胞以下，在实际培养中很少有完全由单细胞组成的植物细胞悬浮系。
2、均一性好，细胞形状和细胞团大小大致相同，悬浮系外观为大小均一的小颗粒，培养基清澈透亮，细胞色泽呈鲜艳的乳白或淡黄色。
3、细胞生长迅速，悬浮细胞的生长量一般2～3天甚至更短时间便可增加1倍。
培养周期的概念 具有一定起始培养密度的单细胞，从开始培养到细胞数目和总重量增长停止这一过程，称为一个培养周期。
悬浮细胞培养的同步化：指同一悬浮培养体系的所有细胞都同时通过细胞周期的某一特定时期。(植物细胞在悬浮培养中的游离性较差，容易团聚进入不同程度的分化状态，因此要达到完全同步化相当困难。)
细胞同步化的方法：①分选法：通过细胞体积大小分级，直接将处于相同周期的细胞进行分选，然后将同一状态的细胞继代培养于同一培养体系中。
②饥饿法：在一个培养体系中，如果细胞生长的基本成分丧失，则导致细胞因饥饿而分裂受阻，从而停留在某一分裂时期。
③抑制剂法：通过一些DNA合成抑制剂处理细胞，使细胞滞留在DNA合成前期，当解除抑制后，即可获得处于同一细胞周期—G1期的同步化细胞。 ④低温法：冷处理也可提高培养体系中细胞同步化程度。
单细胞培养
1、平板培养
2、看护培养
3、微室培养
4、双层滤纸培养 植物次生代谢产物：植物中一大类并非植物生长发育所必需的小分子有机化合物，其产生和分布通常有种属、器官组织和生长发育期的特异性。次生产物在植物中的合成与分解过程称为次生代谢。
植物细胞大规模培养的技术要求：从细胞生长与培养技术方面讲必须满足以下3个条件
1、培养的细胞在遗传上应是稳定的，以得到产量恒定的产物。
2、细胞生长及生物合成的速度快，在较短的时间内能得到较高产量的终产物。
3、代谢产物要在细胞中积累而不被迅速分解，最好能将其释放到培养基中。 固定化培养系统--固定化培养技术的优点在于：
1、可以较容易地控制培养系统的理化环境，从而可以研究特定的代谢途径，并便于调节;
2、细胞位置的固定使其所处的环境类似于在植物体中所处的状态，相互间接触密切，可以形成一定的理化梯度，有利于次生产物的合成;
3、由于细胞固定在支持物上，培养基可以不断更换，可以从培养基中提取产物，免除了培养基中因含有过多的初生产物对细胞代谢的反馈抑制，也由于细胞留在反应器中，新的培养基可以再次利用这些细胞生产初生产物，从而节省了生产细胞所付出的时间和费用;
4、正是由于细胞固定在一定的介质中，并可以从培养基中不断提取产物，因此，它可以进行连续生产。
7 利用细胞培养生产有用物质的一般程序
1、选材 应注意条件：①药效肯定②对其有效成分有充分的了解④市场短缺或价格昂贵;③有测定有效成分和药理的可靠方法⑤取有药效成分的部位，且该部位较易形成愈伤组织。
2、细胞株系建立
3、大量培养
4、产品提取与纯化 第七章 原生质体培养与融合 原生质体(Protoplast)：去掉细胞壁的由质膜包裹、具有生活力的裸露细胞。
亚原生质体(subprotoplast)：在原生质体分离过程中，有时会引起细胞内含物的断裂而形成一些较小的原生质体就叫做亚原生质体。它可以具有细胞核或没有细胞核。
核质体(nuclearplast)：由原生质膜和薄层细胞质包围细胞核形成的小原生质体。也称为微小原生质体(miniprotoplast)。
胞质体(cytoplast)：不含细胞核而仅含有部分细胞质的原生质体。
原生质体材料预处理 (暗处理，预培养和低温处理)原因：预质壁分离可使胞壁内表层充分暴露，增加胞壁降解酶与胞壁的接触面而提高胞壁降解速度;降低原生质体内电解质渗漏，防止在分离期间外来酶被吸入细胞内，降低原生质体对酶液中可能存在的有害影响的敏感，提高原生质体的稳定性和存活率。 原生质体纯化方法有：
离心沉淀法 原理：应用原生质体的比重大于溶液，离心后原生质体沉于底部。 漂浮法 原理：应用渗透剂含量较高的洗涤液使原生质体漂浮在液体的表面。
接口法 原理：选两种不同渗透浓度的溶液，其中一种溶液的密度大于原生质体的密度，另一种溶液的密度小于原生质体的密度，原生质体介于两种溶液之间。 原生质体培养方法
1、固体包埋培养(原生质体纯化后，离心，用培养基稀释至一定密度，再与0.6%琼脂或低溶点琼脂糖(37C左右)混合，培养于培养皿中。)
2、固体平板培养
优点：可以跟踪观察单个原生质体的发育情况，易于统计原生质体分裂频率。 缺点: 操作要求严格，尤其是混合时的温度掌握必需合适，温度偏高则影响原生质体的活力，温度偏低则琼脂糖凝固太快原生质体不易混合均匀。
3、液体浅层培养(将含有原生质体的培养液在培养皿底部铺一薄层，封口后进行培养。) 优点：操作简单，对原生质体的损伤小，且易于添加新鲜培养基转移培养物。 缺点：原生质体分布不均匀，常常发生原生质体之间的粘连现象而影响其进一步的生长和发育。此外，难以跟踪观察某一个细胞的发育情况。
4、固、液培养 优点：固体培养基中的营养物质可缓慢释放到液体培养基中，如果在下层固体培养基中加一定量的活性炭，则还可以吸附培养物产生的一些有害物质，促进原生质体的分裂和细胞团的形成。
缺点：不易观察细胞的发育过程。
5、共培养法(将生长迅速的原生质体培养物与难于培养的原生质体混合)
6、琼脂糖珠培养
7、饲养层培养
原生质体再生：再生细胞壁、细胞分裂和生长、植株再生(愈伤组织形成)
原生质体融合又称体细胞杂交是指将植物不同种、属甚至科间的原生质体通过人工诱导融合，然后进行离体培养，使其再生杂种植株的技术。 融合方法
1、NaNO3法 NaNO3的作用：中和质膜的负电荷，使原生质体不再相互排斥，而紧密结合 8 在一起 不足：诱导频率不高。
2、高pH-高Ca离子法 优点：杂种产量高。不足：高pH值对细胞有毒害作用
3、PEG法 特点：融合频率高、可重复性强、诱发融合无特异性、毒性较低
4、电融合法 特点 不存在对细胞毒害的问题、融合效率高、融合技术操作简便 原生质体的融合过程包括3个主要阶段：1)两个或多个原生质体的质膜彼此靠近; 2)局部区域质膜紧密粘连，彼此融合;3)融合完成，形成球形的异核体或同核体。 供体-受体式细胞融合包括非对称杂交和细胞质杂交两种方式。
非对称杂交是一亲本的细胞核和细胞质与另一亲本的少量核物质(1～2条染色体)和全部细胞质融合;
细胞质杂交是一亲本的细胞核和细胞质及另一亲本的全部细胞质融合，可能使两种来源不同的核外遗传成分(细胞器)与一个特定的核基因组结合在一起，这种杂种叫细胞质杂种。 第九章后
1, 超低温通常是指-80℃以下的低温。常用的保存介质或容器有：超低温冰箱(-80～-150℃)、液氮(-196℃)和液氮蒸汽箱(-140℃液氮)等。
2, 用于离体超低温保存的植物材料一般有愈伤组织、悬浮细胞、胚、花粉和茎尖等。 3, 细胞内外水的冻结状态时细胞冻存技术的关键。
4, 种质超低温保存的关键是降温冰冻过程中避免细胞内结冰。在降温过程中必须使细胞发生适当程度的保护性脱水，使细胞内外的水流到细胞外结冰，并且在化冻过程中防止细胞内次生结冰。因此针对不同种类的植物材料，筛选合适的冰冻保护剂，采用适当的降温冰冻速度和化冻方式可能使细胞不受损伤或使损伤减小到最低程度。
5, 超低温保存植物种质资源的程序包括培养材料的准备、预处理、冰冻及保存、化冻处理、细胞活力和变异的评价及植株再生等几个步骤。
6, 降温方法从降温方式来看，有快速冰冻法、慢速冰冻法、两步冰冻法和逐级冰冻法等。 7, 玻璃化：是指液体转变为非晶体的固化过程。使溶液玻璃化得两条途径：大幅度提高冷却速率和增加溶液的浓度。
8, 玻璃化溶液(PVS1),其中包含了20.5%的DMSO、15.5%的乙酰胺、10%的1,2-丙二醇以及6%的聚乙二醇，他们分别起到冰冻保护、毒性中和、强化玻璃化和非渗透聚合的作用。 9, 超低温保存方法主要有：玻璃化法、包埋玻璃化法、干燥法、预培养法、预培养-干燥法和包埋脱水法。
10, 包埋脱水法的三个步骤：先将材料用藻酸钙包埋，然后将包埋后含有保存材料的藻酸钙小珠在含有高浓度(或梯度浓度)蔗糖的培养基上预培养，最后侵入液氮。
11, 玻璃化法是将生物材料经极高浓度的玻璃化溶液快速脱水后直接投入液氮，使生物材料连同玻璃化溶液发生玻璃化转变，进入玻璃态。
细胞工程范文第5篇
工程总承包项目经理作业指导书
------------------
作者：刘赞基 原创
工程总承包项目经理 工作手册
编制人： 审核人： 审批人：
研究设计院总承包部 2006年12月15日
目 录
第一部分 工程总承包项目经理的任职条件和岗位职责„„„(2)
第二部分 工程总承包项目经理工作手册及工作流程„„„..(3)第一章 项目启动程序„„„„„„„„„„„„„„„„..(3)第二章 项目的批复手续„„„„„„„„„„„„„„„..(5)第三章 项目开工程序及条件„„„„„„„„„„„„„.(12)第四章 设计交底及图纸会审管理程序„„„„„„„„„(12)第五章 施工、安装分承包商的确定程序„„„„„„„„(14)第六章 材料采购及管理程序„„„„„„„„„„„„..(15)第七章 施工过程管理程序„„„„„„„„„„„„„..(16)第八章 工程进度款支付、结算和财务管理制度„„„„..(21)第九章 工程竣工验收项目交付程序„„„„„„„„„..(23)第十章 工程资料管理及FIDIC合同条件简介„„„„„..(25)第十一章 项目团队建设„„„„„„„„„„„„„„„.(27)
设计、施工、采购/交钥匙工程总承包项目经理 工作指导书(代工作手册)
编制依据：
1、《建设项目工程总承包管理规范》(GB/T50358-2005)
2、核工业第四研究设计院《质量手册》
3、核工业第四研究设计院《质量管理体系程序文件》
4、《中华人民共和国建筑法》
5、《中华人民共和国合同法》
6、《中华人民共和国招标投标法》
7、《最新建设项目工程总承包管理规范实施手册》(当代中国音像出版社 2005年7月版)
第一部分工程总承包项目经理的任职条件和岗位职责
一 工程总承包项目经理的任职条件：
1、具有注册工程师或注册建造师执业资格，熟悉工程和设计且具有8年以上设计及工程管理工作经历、取得有关部门颁发的项目经理资格证书的高级工程师担任。
2、具备决策、组织、领导和沟通能力，能正确处理和协调与业主、相关各方之间及企业内部各专业、各部门之间的关系。
3、具备工程总承包项目管理的专业技术，有关项目管理的经济和法律、法规知识。
4、具有类似项目的管理经验。
5、具有良好的职业道德。
6、特殊情况时，由各实体推荐、主管职能部门同意并经院总工程师批准、由具有相应能力的人员担任。
二 工程总承包项目经理的职责：
1.项目经理应贯彻执行国家有关的法律、法规、方针、政策和强制性条文，在合同条款、院规章制度规定的范围内，以合同条款为依据，全面负责项目实施的组织领导、协调和控制，对项目的进度、费用、质量、安全全面负责，依法履行院工程承包的义务并维护院的权益。
2.组建项目组、决定项目组的组织机构和组织形式，选定项目组的主要成员，有效地开展项目工作。
3.主持制定质量、安全、消防、文明施工达标措施，按工程质量要求制定相应的管理办法，主持制定项目组的各项规章制度及各类技术人员的岗位职责。 4.组织制定项目进度计划和费用预算，对进度和费用进行全面管理，，定期检查，实施有效控制。
5.组织制定项目设计方案的评审，做好同业主的沟通，跟踪设计变更和设计优化进程。
6.组织签订施工分包合同及设备、材料采购合同，并根据总承包合同及分包合同，处理与业主、分包单位在执行合同中的变更、纠纷、索赔、仲裁等事宜。 7.定期向业主、院领导和院有关主管部门汇报工程进展情况和项目实施过程中的重大质量问题，以及问题的处理及解决情况。
2 8.组织好工程的竣工交付、考核、竣工结算等工作，办理业主对工程项目的正式验收文件及交付文件。
9.负责组织处理项目的管理收尾和合同收尾工作。组织好项目文件、资料的整理归档工作，做好竣工备案手续。
10.项目结束时，对项目组成员提出考核意见，项目经理本身向工程总承包部总经理或主管院长作出述职报告。
第二部分工程总承包项目经理工作手册及工作流程
第一章 项目启动程序：
1、 确认总承包合同内容，并对合同进行评审。对建设工程项目进行合理分析和有效测算，为公司决策提供重要依据。
2、 为项目经理部组建及人员配备提出条件。
3、 成立项目经理部，确定项目组织架构、项目组成员及人员分工。
4、 组织项目组成员第一次工作会议。建立工作例会制度。
5、 组织编制项目实施策划文件。项目经理根据工程总承包合同要求编制项目实施计划。内容包括：
(1)、概述(编制依据、项目范围)
(2)、项目管理(项目工作分解结构WBS、组织结构、项目协调、项目管理软件、合同管理、项目文件资料管理)
(3)、项目控制(质量、进度、费用、变更) (4)、项目实施(设计、采购、施工、开车) (5)、风险和对策
(6)、其它规定和要求。
在项目实施计划中必须明确以下内容：
○1明确项目的范围，包括项目可交付成果和项目目标。
○2明确项目的主要风险，对主要风险进行深入定性和定量分析，并明确应对措施和应对费用。
○3明确项目工作分解结构(WBS)，对每个工作包都有成本估算、计划时间和职责分工。
○4明确设计、采购、施工、开车工作的原则、设计和采购裕量、分包方案、提前安排的工作计划以及主要控制点的实现日期。 ○5明确与业主的协调程序。 ○6明确项目的变更控制计划。 ○7明确人力资源计划和人选。
○8明确实行月报告制度。设计、采购、施工、开车经理每月向项目经理提交月报告;项目经理每月向公司项目主管和业主提交月报告。
6、 把各项工作分配落实到相关经理。根据工程特点设置：设计经理、采购经理、施工经理、开车经理等
7.根据合同总额确定项目部人数和岗位设置(选配支持人员)如下表： 合同总额
(人民币) 项目人数
(人) 岗位设置(技术支持人员)
1500万以下 3-4人 项目经理(兼现场经理、施工经理、设计经理)、采购经理、
3 安全与控制经理 施工经理、技术工程师(根据复杂程度)
1500-5000万 4-6人 项目经理(兼现场经理)、设计经理、施工经理、商务经理、安全与控制经理 采购经理、技术工程师(根据复杂程度)
5000万-1亿 6-12人 项目经理(兼现场经理)、设计经理、施工经理、商务经理、安全与控制经理 现场经理、采购经理、安全工程师、技术工程师(根据复杂程度)、信息管理员 1亿-5亿 15-30人
项目经理、项目副经理、设计经理、现场经理、施工经理、商务经理、采购经理、开车经理、控制经理、安全经理 安全工程师、技术工程师、信息管理员、现场设计小组、财务经理、行政经理等。
第二章 项目的批复手续：
需要国家和省审批的基本建设项目，必须经过如下审批手续，即：项目建议书、可行性研究报告(含招标方案)、初步设计、投资计划和开工报告，这五道手续均需要报省发改委或由省发改委审核后转报国家发改委审批。房屋建筑项目和一些小型的农业项目(不含水利)、高新技术产业化项目审批手续可适当简化，项目建议书和可行性研究报告两道审批手续可合并为一道手续;此外，列入省重点、大中型项目中长期规划或前期工作计划、需要报省审批的基建项目可免予审批项目建议书，直接报批项目可行性研究报告。 一 、建设工程项目报建 1. 所需资料
a.《***市建设工程报建表》(到市报建处领取) b.企业法人营业执照及有关证明原件和复印件 c.项目建议书批文原件及复印件
d.银行出具的建设资金落实证明(验资报告)
e.《**市建设单位工程技术人员和管理人员核定申报表》(到市报建处领取) f.专业技术人员和管理人员技术职称证书原件及复印件 g.《项目配套建设审核申请表》 h.《新开工审核通知单》
二、工程项目设计招标办理 1. 所需资料
a.报建工程项目IC卡(如果有) b.**市建设工程设计招标项目登记表
c.《**市建设工程设计招标文件报批表》(到市招标办领取) d.《**市建设工程设计评标小组报批表》(到市招标办领取) e.工程设计任务书 f.建设用地规划许可证 g.工程项目选址意见批文 2.办理程序
a.备齐上述资料
b.到市设计招标办办理
三、设计方案评标会召开及设计单位中标办理 1. 所需资料
4 a.项目设计方案、建设用地规划许可证、项目选址意见书、设计任务书、项目建议书批文等若干份 b.会议通知书
c.设计方案评标会会议纪要 d.评委评标意见书 2. 办理程序 a.备齐上述资料
b.提前三天分送各评委
c.到市招标办召开评标会(会务费×××元) 中标办理
四、建设工程规划设计要求的申办 1. 所需资料
a.**市建设工程规划设计要求申请表(到区规划局领取)1份 b.计划批准文件 1份 c.土地使用权属证件 1份 d.房屋权属证 1份 e.危房鉴定报告
f.地形图(划出用地范围) 2份 2.办理程序 a.备齐上述资料
b.送区规划局规划科办理
五、工程项目设计方案深化、修改， 根据规划局批文要求修改设计方案。 六?p设计方案审定会召开 1. 所需资料
a.设计方案文本 12份
b.项目建议书批文，建设用地规划许可证及批文，区府土文件 若干份 c.邀请专家 2. 申办程序 a.备齐上述资料
b.分送至计委、规划局、防疫站、环保局、消防处、住宅局、园林局等部门c.召开方案审定会 七?p设计方案报送审批 1. 所需资料 a.选址意见书
b.规划设计要求通知单 c.地形图(划出用地范围) d.设计方案 2份 e.地名批文
f.项目建议书批文 2.办理程序
a.备齐上述资料
b.到区规划局规划科办理
八?p可行性研究报告编制与报批 1. 所需资料
a. 用地计划审核意见书
b. 项目建议书批文
c. 用地计划许可证及批文 d. 营业执照
e. 开发资质证书
f. 住宅项目配套条件审核申请表 g. 资本金出资承诺书 h. 设计方案文本
i. 环境影响评价报告(工业项目) j. 其他相关文件 2. 办理程序 a.备齐上述资料
b.送投资咨询公司编制并准备一份可行性研究报告申请报批文件(红头文件) c.送发改委报批
九、扩初会召开
根据方案审定会各职能部门方案会审意见进行扩初设计 1. 所需资料
a.扩初设计文本若干份 b.邀请专家 2.申办程序
a.备齐上述资料
b.分送至计委、规划、防疫、环保、消防、住宅(房管)、园林、交通、环卫、供水、燃气、供电、电信、广电等主管部门。 c.召开扩初会议
扩初意见征询及扩初批复 1.所需资料 a扩初会议纪要
b.根据扩初意见修改后的总平面图及扩初文本 c.关于要求报批扩初的申请报告(红头文件)由各职能部门签署征询意见的总平面图
2.申办程序 a.备齐上述资料
b.分送至计委、规划、防疫、环保、消防、住宅、园林等部门征询意见 c.送规划局规划科报批
十、项目配套条件审核报批 1.所需资料
a.《项目配套建设条件审核报批》
b.项目建议书或可行性研究报告报告批文 c.地形图和管线图(划示用地范围) d.总平面图若干份
e.建设用地规划许可证及批文 f.其他相关资料 2.申办程序
a.备齐上述资料
b.送建设局总工办办理
6 十
一、勘察招投标与勘察单位的中标办理 1.所需资料
a.**市建设工程勘察招投标项目登记表
b.《市建设工程勘察招投文件报批表》(到市招标办领取) c.《市建设工程勘察评标小组报批表》(到市招标办领取) d.设计中标通知书 2.申办程序 a.备齐上述资料
b.到市勘察招标办办理
十二、住宅项目开发计划的办理 1.所需资料
a.住宅项目新开工申请表
b.项目配套建设条件审核意见通知书 c.建设项目立项批准文件
d.建设用地规划许可证或建设使用地批准书 e.申请单位现有空置房情况 f.住宅建设配套费交纳情况 2.申办程序
a.备齐上述资料 b.到建设局办理
十三、建筑工程项目规划许可证办理 1.所需资料
a.总平面图 10份 b.建筑图 7套
c.结构图(基础) 2套 d.给排水图3套
e.建设项目计划批准文件 f.土地使用权或用地批准书 g.应拆房屋权属证明
h.地形图(划出用地范围及建筑物位置) 10份 i.分层面积表 j.建筑工程预算书
k.消防、环保、卫生防疫、园林、住宅配套、人防等有关部门审核意见单 2.申办程序
a.备齐上述资料
b.分送消防、环保、卫生防疫、园林、住宅配套、人防、交通、建管、土地等部门签署意见
c.将意见汇总送至规划局 十
四、施工招标办理 1.所需资料
a.市招标办授权管理通知 b.招标项目登记表 c.项目建设有关批复 d.总平面图
7 e.报建表
f.住宅项目新开工计划 g.住宅项目配套条件审核 h.设计中标通知书
i.法人证明或对其代理人的委托书 j.委托机构招标协议 k.代理机构资质 l.资金落实情况证明 m.监理单位资质 n.监理合同
o.建设单位资质 p.建设单位申请材料 q.公开招标发布信息 r.公开招标报名登记表 s.公开招标入围条件 t.投标单位资质审核 u.招标文件报批表 v.招标文件 w.工程量清单
x.招标文件答疑会会议纪要 y.标底
A1.开标情况汇总表 B1.询标记录 C1.评标方法 D1.评标资料
E1.决标情况汇总表 F1.中标通知书
G1.外地施工企业任务量单 H1.中标单位投标资料 I1.未中标单位投标资料 J1.施工合同 2.办理程序 a.申请授权
b.发布招标信息 c.接受施工单位报名
d.初选入围施工单位，发标书 e.招标文件答疑会 f.开标
g.准备(1)项所有资料及工程造价万分之×支票一张 h.办理中标手续
十五、施工监理单位甄选 (略比施工招标简单，此处从略)十
六、施工许可证办理 1.所需资料 a.申请表
b.建设规划许可证 c.资金入账凭证
d.三通一平的有关证明 e.施工合同副本，廉洁协议
f.监理合同，住宅项目监理登记证
g.建设工程项目质量和安全监督申报所需资料 h.中标通知书
i.施工图审核意见表
j.住宅项目建设开工计划 k.施工组织设计 l.施工安全措施 m.城建档案责任书
n.流动人口计划生育目标责任书(施工方) 2.办理程序
a.将图纸送质监站审核
b.根据质监站审核意见进行图纸修改 c.备齐所需资料 d.送建管处办理
十七、供电规划图设计 1.所需资料
a.总平面图2份 b.地形图一份 2.办理程序 a.备齐上述资料 b.送供电局
c.设计人员现场查看，设计出图
十八、各配套部门外线设计及施工图纸审核 1.所需资料
a.总平面图若干份
b.水、电、煤气、电视、电话等图纸(根据扩初意见修改后的图纸)若干套c.建筑立面图若干套
d.供电规划图(供电外线设计及供电图纸审核需要) 2.办理程序
a.备齐上述资料
b.送各有关部门审核并请各部门进行外线设计 十
九、水泵房及变电站手续办理 1.所需资料 a.总平面图
b.变电站、水泵房定位图 2.办理程序 a.备齐上述资料
b.分送供电局及自来水公司进行电气及供水设计，并鉴定合同 c.设计变电站、水泵房土建图 d.技术交底
e.工程施工
f.设备安装、调试 g.竣工验收
第三章 项目开工程序及条件：
一、工程开工程序： 1所需资料： 1.1设计图纸
1.2建设工程规划许可证 1.3建设工程施工许可证 1.4施工组织设计 1.5开工报告 2办理程序 ：
发放图纸，进行技术交底，规划局定位验线，开工典礼，工程开工。
二、工程开工条件：
1、设计图纸已经审查通过
2、施工单位已落实
3、规划许可证和施工许可已办理完毕
4、施工组织设计经建设监理单位总监批准
5、规划局已定位验线
6、开工报告已批准。
第四章 设计交底及施工图会审管理程序：
一、设计交底
1.负责组织由设计单位向建设单位和施工单位进行的施工图交底，交底地点在建设项目所在地。
2. 在接到详细设计文件后，立即分发给承担工程施工的各个单位，以及使用单位、监理单位、物资供应和质量监督等单位，督促各单位对详细设计进行预审。 3.项目部负责汇总、审查各预审单位提出的问题，并以书面形式送至设计单位。 4.施工图交底分装置(或单项)交底和专业交底两部分内容。原则上按主项分专业集中一次进行，特殊情况下建设单位可要求按施工程序分次进行。 5.详细设计交底的主要任务是：交代设计意图;说明设计文件的组成和查找办法，以及图例符号表达的工程意义，明确设计、施工、验收应遵守的标准、规范，介绍同类工程的经验教训，解答建设单位和施工单位提出的问题。
二、施工图会审
1、在单项工程开工之前，工程项目管理部负责组织设计单位、施工单位、使用单位、监理单位、物资供应单位的技术人员参加施工图会审，根据会审确定事项，编制会审纪要并加盖公章后发放有关单位。
2、有权拒收质量不合格的施工图或责成修改，对由于图纸质量不合格造成的损失，可按建设工程设计合同的相应条款提出处罚意见，对会审中确定的问题要求设计单位修改。
3、经审查确有必要对基础设计进行修改的重大问题，应按规定报设计原审批部门批准。
4、审查是否符合国家有关强制性条文。 5.施工图会审内容：
10 施工图会审内容包括符合性审查、工艺要求会审和施工条件会审三部分内容。 5.1、符合性审查指审查详细设计是否按照批准的基础设计确定的原则和内容进行，有无与基础设计不一致或重大修改。
5.2、工艺要求会审是指详细设计是否具有先进性，能否满足生产工艺要求，确保正常开工投产，安全平稳运行。具体审查内容如下： ⑴工艺流程及物料平衡计算是否正确。
(2)设备选型及重要工艺管道的选材、选径及布置是否正确合理。
(3)采用的新技术、新工艺、新设备、新材料是否成熟、可靠、经济合理，有无可行的技术保证和组织措施，尤其要审查有无利用项目进行与工程无关的新技术开发研究的试验等情况。
(4)燃料、水、电、汽、风等辅助系统及原料、产品储运系统是否配套，设计能力是否满足生产正常运行要求，工艺设备是否可靠。
(5)是否满足国家和上级公司关于环境保护、工业卫生、节能、抗震、消防安全等有关部门法规的要求。
(6)设计依据的标准是否符合国家和上级公司的规定，有无采用已停止使用的标准规范，有无卮肀曜肌?BR>(7)有无影响开、停工及防冻、防凝等生产的重大问题的设计错项及漏项等。
(8)操作适用性会审主要包括：设备布置、管道走向、阀门位置、仪表盘位、操作通道等是否合理，便于操作、监控和管理。
3、施工条件会审的主要内容：
⑴查对图纸、说明书、相关技术文件、材料表等是否齐全，是否与目录相符，有无遗漏，有无设计漏项;施工图中的技术条件、质量要求及推荐或指定的施工验收规范是否符合国家和行业现行的标准、规范。
(2)设计选材、选型是否合理，是否影响安装，采用的新技术、新工艺、新设备、新材料与国内现阶段施工条件及技术水平是否相适应。
(3)专业图之间，专业图内各图之间，图与表之间的规格、型号、材质、数量、方位、坐标、标高等重要数据是否一致，是否有“错、漏、碰、缺”及不能或不便于施工操作之处。
第五章 施工、安装分承包商的确定程序：
一、对施工、安装分承包商的确定，原则上采用公开招标、邀请招标方式确定。招标由项目经理组织，项目经营部负责实施。
二、招标文件、合同文本的确认(评价和选择)必须执行院质量管理体系程序文件的有关规定。
对于一般项目由项目经理负责，工程总承包部总经理审批大型项目及新工艺、新方法、新设备、技术复杂，军工等项目由工程总承包部负责，主管副院长审批。院长指令性项目由院项目管理部负责，主管副院长审批。
三、施工、安装分承包商合同的评审必须执行院质量管理体系文件的相关规定。 1.评审方式分为:会议评审和会签评审。
1.1会议评审。院长指令性项目，或采用新工艺、新设备、新材料、新结构形式、技术复杂的大型项目，或业主有特殊要求的项目，采用会议评审方式。院长指令性项目的会议评审由项目管理部组织，大型项目由工程总承包部组织。会议应有记录，工程总承包部整理并填写“产品要求评审表”。
1.2会签评审。除1.1款外的大型项目和一般项目可采用书面会签评审方式。会签的范围:项目管理部主任，项目负责人、工程总承包部总经理、项目经理，工
11 程总承包部整理并填写“产品要求评审表”。 2.合同评审的时机、频次。
评审时机是投标前、签订合同文本前以及接受合同的更改前。
评审频次，如达成共识，评审一次即可;如未达成共识则组织上次参加评审的人员再次进行评审。评审结果及时向主管副院长汇报。如工程有后续合同，应再次评审，方式和内容可简化。
四、项目的分类，大型项目划分准则如下：
2.1民用项目：2万m2及以上的单体公共建筑;25层及以上的高层住宅;15万m2及以上小区。
2.2电力热力项目：单机容量50MW及以上的发电厂(热电厂);单炉额定供热量116MW及以上的供热站;管径900mm及以上的供热管网项目;110KV及以上的单独签订的变配电项目。
2.3医药项目：投资额1亿元及以上的生物制药、原料药项目;投资额0.8亿元及以上的制剂。
2.4核工程项目：矿产量10万吨及以上的矿冶项目;投资额1亿元及以上的矿冶项目;投资额0.5亿元及以上的三废治理独立项目。 2.5技术复杂或采用新工艺、新设备的项目。
五、项目的招投标及合同签订工作应符合《中华人民共和国招标投标法》和《中华人民共和国合同法》的有关规定和中国核工业集团公司有关招投标及合同管理的有关规定。
第六章 材料采购及管理程序：
一、项目部的材料管理职责：
1、审批施工单位的材料计划。
2、参与设备材料的招标。
3、组织入场材料的复验。
4、定期召开材料供应协调会，解决施工中出现的材料缺口问题。
5、负责协调不合格材料、设备的退货工作，为材料设备索赔提供必要的依据。
二、在材料采购过程中应坚持以下原则：
1、坚持招标采购，由项目经理部和业主代表共同审查供货单位资质，具备条件的，方可参加投标。
2、对于特殊情况不能进行招标采购的材料，按照比质、比价，比运距、比信誉的原则进行订货。
3、订货时应以概算价为依据，原则上不可突破概算，如确实超概算的，由公司主管领导批准后方可订货。
4、设计单位原则上不得推荐供货商，对于特殊专用设备、材料需设计单位推荐的供货厂家，应要求其推荐三家以上供货单位供择优选定。
5、施工单位自购的用于工程上的物资，供货商的选择须经项目部批准。
6、物资采购过程中应坚持公正、透明、择优的原则。
7、对于技术要求较高的设备或材料订货，应在合同签订前由工程项目经理部组织公司各有关部门、生产单位、设计单位等与供货商进行技术交流，并签订技术协议，做为订货依据。
三、进行物资采购招标时应坚持优质、优价的原则，并按相应的工作程序进行。
四、项目采购文件由项目经理组织有关人员编制。
五、项目采购文件编制完成应按照院质量管理程序文件相关规定进行审批。
12 1.对院长指令性项目，由项目管理部组织项目经理及相关人员编制并经项目管理部审定，主管副院长批准。 2.对大型项目，由工程总承包部组织项目经理及相关人员编制采购文件并由工程总承包部审定，项目管理部批准。 3.对一般项目，由项目经理组织有关人员编制采购文件并有项目经理审定，工程总承包部批准。
第七章 施工过程管理程序
一、根据国家有关法律、法规 ，为了进一步加强建设项目总承包的管理工作和确保工程进度、质量、安全，使施工管理更加科学化、规范化，提高经济效益，特制定本程序。
二、工程总承包项目经理部的主要职责：
1、负责监督、检查、指导工程建设有关单位贯彻执行国家有关工程建设的法律、法规。
2、负责按项目总工期要求组织编制项目总体建设部署和施工网络控制图。
3、组织制定和修改完善企业内部的有关施工管理办法、规章制度和实施细则。
4、负责对施工单位的资质进行审查工作。
5、负责办理各种有关施工许可证，做好“四通一平”和各项准备工作及外部协调工作。
6、负责单项工程开、竣工报告填写并上报，审批单位工程或独立分部工程的开竣工报告。
7、负责施工总平面管理、文明施工管理工作。
8、对工程的全过程、全方位进行管理，控制施工进度、施工质量、施工阶段投资和施工安全。
9、协调设计、施工单位、物资采购部门、生产部门定期或不定期组织召开的施工协调会。
10、组织工程中间交接工作。
11、配合生产部门做好联动试车及投料试车工作。
12、审核施工单位上报的施工资料及竣工图。
三、开工报告审查
1.大型总承包项目的开工报告由项目经理填写上报工程总承包部审核，院工程项目管理部批准。
2.一般项目总承包工程中的单位工程(或分部工程)的开工报告，由施工单位填写(土建、安装由不同的施工单位承包时，也要分别填写)，报项目经理部审批。 3.院长指令项目开工报告由项目经理填写上报院项目管理部审核，主管副院长批准。
4.审查开工报告时，主要检查征地搬迁，“四通一平”是否完成，设计交底是否完成，施工组织设计是否编制并审批完，施工单位的劳动力、施工机具及工程材料是否已到达现场，具备以上条件后方可签发开工报告，准许开工。
四、竣工报告审查
1.大型总承包项目的竣工报告由项目经理填写上报工程总承包部审核，院工程项目管理部批准。
2.一般项目总承包工程中的单位工程(或分部工程)的竣工报告，由施工单位填写(土建、安装由不同的施工单位承包时，也要分别填写)，报项目经理部审批。 3.院长指令项目竣工报告由项目经理填写上报院项目管理部审核，主管副院长批
13 准。
4工程项目完工后，施工现场清理、平整完毕，达到生产使用条件，施工单位才能向项目部提交竣工报告，由项目部提请业主，组织设计、施工、监理、生产、质量监督等部门对工程实体和内业资料进行检查，各方均认可后，办理中间交接手续。工业项目在工程投料试生产出合格产品72小时以后，工程项目经理部组织有关单位向生产单位办理工程交工手续或按照总承包合同相关规定办理工程竣工手续。
5.中间交接证书和工程交工证书由施工单位填写，由工程项目经理部、设计、施工、监理、生产等部门签字盖章认可。
五、施工总平面管理
1.施工总平面管理包括对施工单位生活、施工暂设设施布置的审查，施工现场的“四通一平”的检查，厂区总图、竖向的施工管理，定位测量的管理。
2.施工总平面管理的原则为布置合理、节约用地、节约材料、节约能源，减少交叉、便于施工。
3.组织落实“四通一平”工作
3.1“四通一平”是指施工用的水、电、路、讯通到施工现场，现场场地平整完，这是工程开工的基本条件。
3.2项目部负责“四通一平”的规划、设计实施工作。
3.3工程项目经理协调施工现场和施工暂设内的水、电等设施的使用。 3.4工程正式开工前，协调好拆迁工作 4. 审核土方平衡方案
工程开工前，应该对原自然地面标高进行测量，通过施工单位、监理单位、项目部的有关人员共同确认，作为土方量计算的原始凭证，然后结合设计，综合各基础挖方及回填土方量，计算出各装置需平衡的土方量，制定土方平衡初步方案，交项目部审核后，上报项目经理审批。 5.由于项目施工要求，需要铺设临时路及采取必要的措施所发生的土方拉运不算在竖向整平内，应纳入工程签证，但整个土方量也要考虑在综合平衡内。
六、施工安全管理
1、安全管理制度：工程施工期间将严格按照以下安全管理制度进行现场安全管理：
安全技术交底制;
班前检查、班后验收制; 周一安全活动制;
定期检查与隐患整改制;
管理人员和特种作业人员上岗制; 安全生产奖罚制与事故报告制。 2 安全管理工作
(1)专业责任工程师负责检查各施工队及专业分包商的安全工作，并负责分部分项工程安全技术书面交底之工作，签证手续须齐全;
(2)分析安全难点、确定安全重点，分析和预控施工过程中施工条件、施工特点。
(3)安全防护设备如有变动，须经项目部安全总监书面批准，并须有变动后相应有效的防护措施，工作完后须按原标准使之恢复，所有其书面资料由安全总监保管;
14 (4)安全生产防护设施应进行必要的、充足的投入。且必须按公司规定购买定点厂家的认定之产品。
七、文明施工管理
1.平面布置及临设工程管理
1.1施工现场必须有平面布置图、质量标准、计划工期、安全措施，要统一规划、严格管理、图物相符、对号入座。
1.2施工场区内要有施工单位标牌，要求字迹工整，位置明显。
1.3搭设的临时设施要规格、整齐，院落平整，内外清洁。工地进出口要设明显标志。
1.4现场内水、气、风等管线要摆放合理，使用方便，严禁发生跑、冒、滴、漏等现象。
1.5现场办公室内的布置应包括以下图表及内容： (1)、组织机构图;
(2)、施工总平面布置图; (3)、施工进度统筹图;
(4)、标准化现场责任区分工图; (5)、质量标准、安全措施;
(6)、主要材料、预制构件、设备一览表。
1.6生活区暂设严格按经审批后的规划及图纸实施，必须符合环卫、安全、保卫要求.。
2.施工过程文明施工
2.1施工现场必须保持平整清洁，材料、物品、设备存放整齐，标识明显，道路畅通。
2.2现场工作人员必须穿工作服、工鞋、戴安全帽。
2.3各工种工序同时施工时，统一规划，严格管理，分清职责，注意安全，做到忙而不乱，秩序井然。
2.4在生产区域施工时，要做到施工区域与生产区域隔离，必须注意保护原有的或已完工的工程或设施。 3.材料堆放管理
3.1大宗材料做到砂石成方，用后清底。
3.2现场水泥要妥善保管，防止受潮、雨淋，其它材料、成品、半成品、构配件、管材、阀门、法兰、弯头等管件，都要区分类别，堆放整齐，标清数量、规格、型号，必要时，做好防雨、防冻、防潮等措施，小件物品要及时入库。 4.设备构件管理
4.1对于未安装好的设备，现场要摆放整齐，不入库的严禁露天存放，有必要时采取防风、防雨措施。
4.2对于已安装的设备，在交叉施工过程中，要采取相应的保护措施，不得损坏和污染。
4.3现场要有严格的成品保护制度，大家负起责任，注意成品保护。
八、施工临时用水
1.施工单位施工临时水管线时，要严格按施工规范进行施工，施工前要进行技术交底，按总体平面图确认坐标点后方可放线施工。管线施工完，必须经甲方联合检查验收合格后，才允许送水。 2.及时缴纳水费。
15 3 .浇砖和砼养护用水必须有人看管不可造成长流水。 4.施工用水管线或阀门要经常维护，减少跑冒滴漏。
九、施工现场用电管理
1.施工用电来自施工临时供电系统时，一定要正式提交用电申请，包括施工平面布置及计算所得的用电负荷，并加盖公章，经项目部审核后方可使用。 2.施工单位必须按现场负责人指定回路，将电源接至自己单位的配电箱，严禁将负荷直接接入变压器。
3.当电源、电缆线穿越正式路面时，要加保护管或进行架空，以免造成漏电、伤人事故。
4.施工单位电源箱必须挂明显的指示牌，并派专人管理，遇到紧急情况，必须及时报告上级管理部门，进行妥善解决。
5.施工临设区电源杜绝私拉乱接现象，严禁使用电炉子和200瓦以上的灯泡。任何单位和个人无权无偿地向其它与工程无关的单位及个人用户供电。
6.施工单位临设区院内的变压器及相关的设备和设施，施工单位负责看管，不得损坏。
7.工程结束后，施工单位应通知项目部有关人员，将拆除的施工电源及时收回。 第八章 工程进度款支付、结算及财务管理制度：
一 、总承包工程进度款支付管理制度在工程总承包合同和分承包合同中予以明确，其支付严格按照合同文件规定执行，这里不再论述。
二、项目财务管理 1 一般规定
2 财务的计划管理 3 项目资金管理
3.1 项目资金管理应保证收入、节约支出、防范风险和提高经济效益。 3.2 承包商财务部门应设立项目专用账号进行项目资金的收支预测、统一对外收支与结算。项目经理部负责与项目造价有关的项目流动资金的使用管理。
3.3 项目经理部应编制年、季、月度资金收支计划，上报承包商财务部门审批后实施。
3.4 项目经理部应按承包商授权配合承包商财务部门及时进行资金计收。资金计收应符合下列要求: 1 项目开工前按合同规定收取预付款。
2 根据合同规定收取工程进度款。如合同为现汇/现金项目，应按月度统计报表编制“工程进度款结算单”，在规定日期内报业主或项目贷款方审批、结算。如业主不能按期支付工程进度款且超过合同支付的最后限期，项目经理部应向业主出具付款违约通知书，并按银行的同期贷款利率计息(视工程实际情况，由项目经理决定)。如合同为延期付款项目，应按合同规定的期限及时出具结算单。 3 根据工程变更记录和证明业主违约的材料，及时计算索赔金额，列入工程进度款结算单。
4 业主委托代购的工程设备或材料，必须签订代购合同，收取设备订货预付款或代购款。
5 如合同规定给予工程材料价差、汇率变更补偿等应按规定计算，并及时向雇主确认，与进度款一起收取。
6 工期奖、质量奖、措施奖及索赔款应根据合同规定与工程进度款同时收取。 7 工程尾款应根据业主认可的工程结算金额及时回收。
16 8根据项目资金计划及收支情况，及时筹措资金保证项目需要。
3.5项目经理部应按承包商下达的用款计划控制资金的使用，成本费用的支出应符合下列要求：
1 对成本的控制符合"项目管理目标责任书"规定的范围。 2对费用的控制符合承包商企业的财务管理制度。 3 严格限定不予支付的情况。
3.6项目经理部应按会计制度规定设立财务台账，记录资金收支情况，加强财务核算，及时盘点盈亏。坚持做好项目的资金分析，通过与项目控制部门的配合，进行计划收支与实际收支对比，找出差异，分析原因，改进资金管理。项目竣工后，结合成本核算与分析进行资金收支情况和经济效益总分析，上报企业财务主管部门备案。承包商企业应根据项目的资金管理效果对项目经理部进行奖惩。
三、竣工结算
1. 在项目竣工完成后，项目财务人员应立即启动项目竣工决算工作，保证在合同规定的时间和要求向业主递交工程竣工结算报告及完整的结算资料。 2. 编制竣工结算应依据下列资料: 2.1 合同;
2.2 合同价格单; 2.3 业主变更通知单;
2.4 工程预算定额、取费定额及调价规定; 2.5 项目有关技术资料; 2.6 工程竣工验收报告; 2.7其他有关资料。
3. 项目经理部应做好竣工结算基础工作，指定专人对竣工结算书的内容进行检查。
4. 在编制竣工结算报告和结算资料时，应遵循下列原则: 4.1 以单位工程或合同约定的专业项目为基础，应对原报价单的主要内容进行检查和核对。
4.2 发现有漏算、多算或计算误差的，应及时进行调整。 4.3 多个单位工程构成的项目，应将各单位工程竣工结算书汇总，编制单项工程竣工综合结算书。
4.4 多个单项工程构成的项目，应将各单项工程综合结算书汇总编制项目总结算书，并撰写编制说明。
5.项目竣工结算报告和结算资料，应按规定报承包商职能部门审定，加盖专用章，在项目性能考核验收合格后，在规定的期限内递交业主审查。合同规定需要会计师事务所审查的，应在送业主审查前完成。
6.工程竣工结算报告和结算资料递交给业主后，项目经理应按照“项目管理目标责任书”规定，督促业主及时办理认定手续并签发项目竣工证书。项目经理部应将业主同意的结算资料送交承包商财务部门，进行工程价款的最终结算和收款，对于延期付款的项目由承包商财务部门指定专人负责收款工作。 7.工程竣工结算后，承包商职能部门应将工程竣工结算报告及完整的结算资料纳入工程竣工资料，及时归档保存。
8.项目非正常终止后，按竣工决算的程序办理工程费用的清算。 第九章 工程竣工验收及交付程序
一、竣工工程验收依据
1、建设工程施工合同;
2、设计文件，包括施工图、文字说明、设计变更及材料代用单等;
3、现行施工及验收规范;
4、现行工程质量检验与评定标准;
5、引进项目原则上执行与外商签定的合同条款，未明确部分按有关的施工标准、规范执行;
6、竣工资料的编制应依据档案管理有关规定。
二、 竣工工程验收的标准
1、工程已按设计文件及施工合同所规定的内容和要求建成，具备了使用条件。
2、工程质量达到了《工程质量检验与评定标准》中“合格”以上要求，具有监理单位和质量监督部门的证明文件。
3、工程交工技术资料真实、准确、完整。
4、已签署了工程保修证明书。
三、项目部参加验收的内部责任分工的原则要求：
1 对于合同或接口程序明确需要工程总承包部组织验收的单位工程，一般情况下现场项目经理指定专人或由进度控制工程师负责组织，中小项目由现场项目经理亲自组织，对于大型建设项目由工程验收责任部门或指定专人负责组织。
2 与单位工程施工相关的负有质量、投资、进度控制职责的专业(土建、安装)工程师均需参加竣工验收，负责确认本专业范围的工程硬件和软件是否符合验收规定。
四、竣工验收前，项目部应办理内部会签手续。
五、软件/硬件的初验/终验
1 单位工程软件/硬件的初验/终验可以分别单独进行验收，也可以一起对硬件和软件进行验收，验收分为初步验收(初验)和竣工验收(终验)。 2 一般情况下应采用会议形式组织验收，参加验收的单位应按组织验收单位发出的验收通知书准时参加验收。
3 初验会议议程一般为：施工单位介绍工程完成情况、自检情况、各单位对硬件进行现场初步验收(对软件进行审查〈如在会议前施工单位已提交可提前进行审查〉)并提出意见、对提出的硬件和软件存在问题确定整改限期。 4 终验会议议程一般为：检查初验确定的整改事项的完成情况，确认工程是否验收合格和移交。
六、会议纪要及其要求
1 验收会议均应进行会议记录，会议组织者应在会前指定专人进行会议记录并由会议记录人员编制会议纪要。
2 会议纪要的编制、签字、分发、记录执行工程总承包部有关会议纪要的规定。
七、软件资料审查及签署的一般要求
1 配合监理公司审查施工承包单位提交的竣工验收文件资料，包括对各种质量检查记录、试验报告以及各种有关的技术性文件的审查;该审查的依据为设计文件、有关规范和规定、有关合同和接口程序规定，如果不全或有相互矛盾和不符之处，由监理公司发出书面文件提出修改要求。
2配合监理公司审核施工单位提交的竣工图，并与已完工程、有关的技术文件如设计图纸、设计变更文件、施工记录及其它文件对照进行核查。
八、接受监理公司移交的和签认的有关验收移交手续。
九、交钥匙工程在办理完相关手续后，将工程交付业主。
18 验收合格后，项目部将项目正式移交给顾客并办理移交手续。并在工程项目竣工验收合格之日起15日内，向当地建设主管部门备案。办理工程竣工验收备案应提交下列文件：(1)工程竣工验收备案表。(2)工程竣工验收报告。(3)法律、行政法规规定应当由规划、公安、消防、环保等部门出具认可文件或准许使用文件。(4)分承包商签署的工程质量保修书。根据合同的规定，搞好售后服务。验收证书由项目部存档。
第十章 工程资料管理程序及FIDIC合同条件管理简介
一、工程资料管理程序
1.为了有效地对技术文件及管理资料进行控制，确保文件的适用性、有效性，防止使用失效或作废的文件，规定了项目部文件和资料的控制范围、编号、审批、标识、发放、更改、换版日常管理以及外来文件的控制要求和方法。 2.管理规定 2.1 文件分类
2.1.1依据类文件(包括质量方针、质量目标、质量手册、程序文件、设计文件、合同及委托书、法律法规、标准规范等);
2.1.2 基础类文件(如地形图、气象资料、工程地质资料等); 2.1.3 条件类文件(如供方资质、提供的文件、施工组织设计等); 2.1.4 项目活动发生的其它文件; 2.2 文件的控制要求
2.2.1 总承包工程依据类文件及上级文件由项目部综合办公室负责接收，送项目经理批阅;
2.2.2 技术文件及管理方案
2.2.2.1工程施工图由项目部根据合同发放到相关人员并留有发放记录; 2.2.2.2 工程洽商记录及变更，必须有设计人员、顾客或其他代表与项目部专业技术人员签字生效，发放并留有记录。 2.3 与生产、服务有关的各类标准、规范
项目工程施工应具备覆盖本工程施工的技术规范和标准，由项目部办公室专门保管、建帐。 2.4 合同文件
合同由工程总承包部和顾客协商拟定，双方签字盖章生效，根据需要下发，保留记录;
2.5 项目过程中的文件
项目部办公室根据项目经理签发单分发。 3 文件控制
3.1 文件分为“受控”和“非受控”两种形式发放。“受控”文件加盖“受控”章并按规定作好发放记录， “非受控”文件分发作好登记记录， “受控”印章在办公室保存。
3.2 记录是一种特殊类型的文件，按《工程总承包记录控制程序》执行。
3.3 各部门或有关人员需要复印某一程序文件或作业文件时，应按有关规定执行。
3.4 对作废文件的回收和处理按有关规定执行。 4 项目管理软件
4.1项目管理软件应选用通用软件，易于操作，便于掌握。
4.2根据项目现场情况建立内部局域网，提高文件传阅和交换速度，所有存档文
19 件均建立电子文档，并实现共享(保密文件除外)。
4.3根据工程情况选用项目辅助管理软件，对建设项目可考虑使用P3项目管理软件，将所用分包商均包含在内，同时配备专职信息管理员，负责网络和设备的维护工作。
二、FIDIC合同条件管理简介
FIDIC《设计采购施工(EPC)/交钥匙工程合同条件》，适用于项目建设总承包合同。
1、其合同主要特点有： 1.1承包的工作范围
业主招标时发包的工作范围为建设一揽子发包，合同约定的承包工作内容包括设计、设备采购、施工、物资供应、安装、调试、保修等。如果业主将部分的设计、设备采购委托给其他承包商，则属于指定分包商的性质，仍由承包商负责协调管理。
1.2业主对项目建设的意图
作为招标文件组成部分的合同条件中，在“业主要求”条款内需明确说明项目的设计要求、功能要求等，如工程的目标、范围、设计标准、其他应达到的标准等具体内容以及风险责任的划分，承包商以这些要求作为编制方案进行投标的依据。招标阶段允许业主与承包商就技术问题和商务条件进行讨论，所有达成协议的事项作为合同的组成部分。 1.3承包方式
合同采用固定最终价格和固定最终日期的承包方式。由于业主只是提出项目建设的意图和要求，由承包商负责设计、施工和保修并负责建设期的设备采购和材料供应，业主对承包商的工作只是进行有限的控制，而不进行干预，承包商按照他选择的方案和措施进行工作，只要是最终满足业主规定的功能标准即可。
2、参与合同管理的有关各方 2.1合同当事人
交钥匙合同的当事人是业主和承包商，而不指任何一方的受让人(即不允许转让合同)。合同中的权利义务设定为当事人之间的关系。 2.2参与合同的有关各方
合同中没有对工程师的有关定义，合同管理工作由业主代表和承包商代表负责，涉及合同履行管理的有关各方还涉及承包商选择的分包商和业主选择的指定分包商。
3、合同文件
构成对业主和承包商有约束力的总承包合同文件包括合同协议书;合同专用条件;合同通用条件;业主的要求;投标书和构成合同组成部分的其他文件5大部分。如果各文件间出现矛盾或歧义时，以上的排列即为解释的优先次序，双方应尽可能通过协商达成一致。如果达不成协议，业主应对有关情况给予应有的考虑后做出公平的确定。
4、风险责任
4.1承包商的风险
此类合盏氖凳┦粲谟沙邪?坛械V饕?缦盏墓潭?鄹窈贤?3邪?逃Ρ蝗衔?谕侗杲锥我鸦竦昧硕怨こ炭赡懿??跋斓姆缦铡⒁馔馐录?推渌?榭龅娜?勘匾?柿稀Mü?┒┖贤??邪?探邮艹械T谑凳┕こ坦?讨杏Φ痹ぜ?降乃?欣?押头延玫娜?吭鹑巍R虼耍?贤?鄹穸匀魏嗡?丛ぜ?降睦?押头延貌挥杩悸堑髡??BR>4.2业主风险
20 业主主要承担因外部社会和人为事件导致的损害，且保险公司不承保的事件。 4.3不可抗力及保险
4.3.1不可抗力。合同中定义的“不可抗力”，除了业主风险外还包括自然灾害造成的损害。
4.3.2保险。合同可以约定任何一方为工程、生产设备、材料和承包商文件办理保险，保险金额不低于包括拆除运走废弃物的费用以及专业费用和利润，保险的期限应保持颁发履约证书前持续有效。 4.3.3不可抗力的后果。属于业主风险事件，应给予承包商工期顺延和费用补偿。属于自然灾害的损害，只给予承包商工期顺延，费用损失通过保险索赔获得。 第十一章 项目的团队建设
1.工程总承包项目的成败关键是要有一个优秀的项目团队。项目部团队特点是成员比较年轻，针对这些特点，应采取合理分工，明确职责的方法，创造一个和谐的团队环境;通过团队成员间的相互帮助，团队活动，形成一个团结和有战斗力的集体。
2.人员是管理的主体，团队建设是关键。管理过程中应以核工业“四个一切”精神即：“事业高于一切,责任重于一切,严细融入一切,进取成就一切”作为团队精神。加强对“精心设计，锐意创新，持续改进，提供优质产品，确保优质服务，创造四院品牌”的质量方针的宣传贯彻。
3.通过开展增强项目部的凝聚力活动，关心单身员工的生活问题，解决员工家庭的实际困难，尽可能减少项目部成员的后顾之忧，使项目成员能全身心关注项目的管理工作。项目部可以通过组织旅游，聚会，联谊等各种活动来丰富团队的业余生活，增加成员集体感，荣誉感和凝聚力。
4.结合总承包部的具体特点，引进科学而有效的管理流程、方法和管理模式，更好的激发干部员工的潜力，创造有利于人才实现价值和脱颖而出的良好环境，做到事业留人，待遇留人，感情留人，让人才安心项目，献身项目。