实验室生物安全知识

第一篇：实验室生物安全知识

病原微生物实验室生物安全知识

一、实验室活动中如何清除手部污染

1.处理完危害性材料和动物后、离开实验室前都要洗手。

2.一般用普通的肥皂盒水冲洗就可以，但在高度危险的情况下，建议使用杀菌肥皂。手要完全抹上肥皂，搓洗至少10秒，用干净水冲洗后再用干净的纸巾或毛巾擦干。

3.洗完手后，应使用纸巾或毛巾来关上水龙头，以防止再度污染洗净的手。

二、如何应对菌毒种的溅出污染

1.如果传染材料溅在眼和面部，应立即到洗眼处冲洗3秒钟，当事人立即停

止工作，撤出，隔离观察和预防治疗。

2.如果传染材料溅在地上应，立即用消毒液消毒，对室内用喷雾消毒，停止工作撤出，对当事人隔离观察和预防治疗。实验室封闭24小时后再消毒，间隔24小时后可继续工作。

3.如果传染材料溅在生物安全柜内，可用消毒纱布遮盖，可继续工作。

4.如果传染材料溅在衣服上应立即停止工作，更换防护服后继续工作。

三、感染性物质破碎或溢出的应急措施

1.应当立即用布或纸巾覆盖瓶子或容器等含有感染物的破碎物品以及培养

物等溢出感染物。在上面倒上消毒剂，至少30秒后将布、纸巾以及破碎物品清理掉。玻璃碎片应用镊子清理。最后用消毒剂擦拭污染区域。

2.如果用簸箕清理破碎物，应当对它们进行高压或放在有效的消毒液内浸 泡24小时。用于清理的布、纸巾和抹布等应当放在污染物容器内。

四、实验室活动中如何正确使用手套

1.所戴手套无漏损。

2.戴好手套后可完全遮住手及腕部，如必要可覆盖实验室罩服或外衣的袖子

3.在撕破、损坏或怀疑内部受污染时更换手套。

4.手套为实验室工作专用。

5.在工作完成或中止后应消毒、摘掉并安全处置。

第二篇：一、生物化学实验室基本知识

第一部分：生物化学实验守则

通过生物化学实验这门课程的学习，能使学生掌握生物化学实验的基本操作及实验技术，使学生分析问题和解决问题的能力及实验动手能力得到训练，并能熟练掌握各种生物化学实验仪器的使用以及准确详实记录实验现象和数据等各项实验技能。

二、实验的进行程序和要求

1.预习学生在课前应认真预习实验指导以及教材有关章节

2.讲解学生在课前应认真预习实验指导以及教材有关章节

3.独立操作与观察在实验中要按实验指导认真操作，仔细观察，作好记录。

4.示教帮助学生了解某些实验中的难点，扩大在实验课有限时间内获得更多感性知识的机会。

5.实验报告实验报告必须强调科学性，实事求是地记录、分析、综合。

三、实验规则和注意事项

1.上实验课时必须携带实验指导、实验报告纸及绘图文具等，按规定座位入座。

2.实验时要遵守纪律。有问题时举手提问，严禁彼此谈笑喧哗，不准在实验室吃食和会 客。

3.要爱护仪器、标本和器材设备，注意节约实验材料、药品和水电。

4值日生要负责清扫地面，收拾实验用品，处理垃圾，关好水、电、门窗后再离开。第三部分 意外情况处置办法

1.割伤、咬伤、抓伤：用水洗净伤口，以医用双氧水消毒，并涂以碘酒或红汞药水，大伤口则应先按紧主血管防止大量出血，急送医院治疗。

2.烫伤和烧伤处理：可在伤处涂上獾油或用75%酒精润湿后涂蓝油烃等烫伤药

3.化学灼伤处理：如果被浓酸灼伤，切忌立即用水冲洗，应先用棉布(纸)吸取浓硫酸，再用水冲洗，接着用3%—5%的碳酸氢钠溶液中和。

第三篇：高中生物实验知识点总结

一、光学显微镜的结构、呈像原理、放大倍数计算方法 结构：

光学部分：目镜、镜筒、物镜、遮光器(有大小光圈)和反光镜(有平面镜和凹面镜) 机械部分：镜座、倾斜关节、镜臂、载物台(上有通光孔、压片夹)、镜头转换器、粗、细准焦螺旋。

注：目镜无旋转螺丝，镜头越长，放大倍数越小;物镜有旋转螺丝，镜头越长，放大倍数越大。

呈像原理：映入眼球内的是倒立放大的虚像。(物镜质量的优劣直接影响成像的清晰程度) 放大倍数：目镜和物镜二者放大倍数的乘积)

注：显微镜放大倍数是指直径倍数，即长度和宽度，而不是面积。

二、显微镜的使用：置镜(装镜头)→对光→置片→调焦→观察

1.安放。显微镜放置在桌前略偏左，距桌缘8—10cm处，装好物镜和目镜(目镜5× 物镜10×)

2.对光。转动转换器，使低倍镜对准通光孔，选取较大光圈对准通光孔。左眼注视目镜，同时把反光镜转向光源，直至视野光亮均匀适度。调节视野亮度只可用遮光器和反光镜，光线过强，改用较小光圈或用平面反光镜;光线过弱，改用较大光圈或用凹面反光镜。选低倍镜→选较大的光圈→选反光镜(左眼观察)

3.观察。将切片或装片放在载物台上，标本正对通光孔中心。转动粗准焦螺旋(顺时针)，俯首侧视镜筒慢慢下降，直到物镜接近切片(约0.5cm)，左眼观察目镜，(反时针)旋转粗准焦螺旋，使镜筒慢慢上升，看到物像时轻微来回旋转细准焦，直到物像清晰。(找不到物像时，可重复一次或移动装片使标本移至通光孔中心)。.观察时两眼都要睁开，便于左眼观察，右眼看着画图。侧面观察降镜筒→左眼观察找物像→细准焦螺旋调清晰

4.高倍镜的转换。找到物像后，把要观察的物像移到视野中央，把低倍镜移走，换上高倍镜，只准用细准焦螺旋和反光镜把视野调整清晰，直到物像清楚为止。 顺序：移装片→转动镜头转换器→调反光镜或光圈→调细准焦螺旋

注：换高倍物镜时只能移动转换器，换镜后，只准调节细准焦和反光镜(或光圈)。 问1：低倍镜换为高倍镜后，若看不到或看不清原来的像，可能原因?(ABC)

A、物像不在视野中 B、焦距不在同一平面 C、载玻片放反，盖玻片在下面 D、未换目镜 问2：放大倍数与视野的关系：

放大倍数越小，视野范围越大，看到的细胞数目越多，视野越亮，工作距离越长; 放大倍数越大，视野范围越小，看到的细胞数目越少，视野越暗，工作距离越短。 故装片不能反放。

5.装片的制作和移动：制作：滴清水→放材料→盖片 移动：物像在何方，就将载玻片向何处移。(原因：物像移动的方向和实际移动玻片的方向相反)

6.污点判断：1)污点随载玻片的移动而移动，则位于载玻片上;

2)污点不随载玻片移动，换目镜后消失，则位于目镜;换物镜后消失，则位于物镜; 3)污点不随载玻片移动，换镜后也不消失，则位于反光镜上。

7.完毕工作。使用完毕后，取下装片，转动镜头转换器，逆时针旋出物镜，旋进镜头盒;取出目镜，插进镜头盒，盖上。把显微镜放正。

实验一：观察DNA、RNA在细胞中的分布(必修一P26)

一.实验目的：初步掌握观察DNA和RNA在细胞中分布的方法 二.实验原理：

1.甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示DNA和RNA在细胞中的分布。

2.盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色休中的DNA和蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。 三.方法步骤： 操作步骤 注意问题 解释

取口腔上皮细胞制片 载玻片要洁净，滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液 用消毒牙签在自己漱净的口腔内侧壁上轻刮几下取细胞 将载玻片在酒精灯下烘干 防止污迹干扰观察效果 保持细胞原有形态

消毒为防止感染，漱口避免取材失败 固定装片 水解 将烘干的载玻片放入质量分数为8%的盐酸溶液中，用300C水浴保温5min 改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，促进染色体的DNA与蛋白质分离而被染色 冲冼涂片 用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片10S 洗去残留在外的盐酸 染色 滴2滴吡罗红甲绿染色剂于载玻片上染色5min 观察 先低倍镜观察，选择染色均匀、色泽浅的区域，移至视野中央，调节清晰后才换用高倍物镜观察 使观察效果最佳

实验二

检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质(必修一P18)

一.实验目的：

尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质

二.实验原理：某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。 1.可溶性还原糖(如葡萄糖、果糖、麦芽糖)与斐林试剂发生作用，可生成砖红色的Cu 2O沉淀。如：

葡萄糖+ Cu ( OH ) 2

葡萄糖酸 + Cu 2O↓(砖红色)+ H 2O，即Cu ( OH ) 2被还原成Cu 2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。

2.脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色(或被苏丹Ⅳ染液染成红色)。淀粉遇碘变蓝色。 3.蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。(蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用，产生紫色反应。) 三.实验材料

1.做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨。(因为组织的颜色较浅，易于观察。)

2.做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡3~4小时(也可用蓖麻种子)。

3.做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。

四、实验试剂

斐林试剂(包括甲液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和乙液：质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液)、苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、双缩脲试剂(包括A液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和B液：质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液)、体积分数为50%的酒精溶液，碘液、蒸馏水。

五、方法步骤：

(一)可溶性糖的鉴定

操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 1. 制备组织样液。 (去皮、切块、研磨、过滤) 苹果或梨组织液必须临时制备。 因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。 2. 取1支试管，向试管内注入2mL组织样液。

3. 向试管内注入1mL新制的斐林试剂，振荡。 应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂;

切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。 斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保存时，生成的Cu ( OH ) 2在70~900C下分解成黑色CuO和水; 甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应，无Cu ( OH ) 2生成。 4. 试管放在盛有50-650C温水的大烧杯中，加热约2分钟，观察到溶液颜色：浅蓝色 → 棕色 → 砖红色(沉淀) 最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不朝向实验者。

也可用酒精灯对试管直接加热。 防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤;

缩短实验时间。

(二)脂肪的鉴定

操 作 方 法 注 意 问 题 解 释

花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片，将薄片放在载玻片的水滴中，用吸水纸吸去装片中的水。 干种子要浸泡3~4小时，新花生的浸泡时间可缩短。 因为浸泡时间短，不易切片，浸泡时间过长，组织较软，切下的薄片不易成形。切片要尽可能薄些，便于观察。 在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液，染色1分钟。 染色时间不宜过长。

用吸水纸吸去薄片周围染液，用50%酒精洗去浮色，吸去酒精。 酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。

用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴上1~2滴蒸馏水，盖上盖玻片。

滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。

低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处，可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒。 装片不宜久放。 时间一长，油滴会溶解在乙醇中。

实验一 观察DNA和RNA在细胞中的分布

实验原理：DNA 绿色，RNA 红色

分布：真核生物DNA主要分布在细胞核中，线粒体和叶绿体内也含有少量的DNA;RNA主要分布在细胞质中。

实验结果: 细胞核呈绿色,细胞质呈红色.

实验二 物质鉴定

还原糖 + 斐林试剂～砖红色沉淀

脂 肪 + 苏丹III ～橘黄色

脂 肪 + 苏丹IV～ 红色

蛋白质 + 双缩脲试剂 ～紫色反应

1、还原糖的检测

(1)材料的选取：还原糖含量高，白色或近于白色，如苹果，梨，白萝卜。

(2)试剂：斐林试剂(甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液)，现配现用。 (3)步骤：取样液2mL于试管中→加入刚配的斐林试剂1mL(斐林试剂甲液和乙液等量混合均匀后再加入)→水浴加热2min左右→观察颜色变化(白色→浅蓝色→砖红色)

★模拟尿糖的检测

1、取样：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液

2、检测方法：斐林试剂(水浴加热)或班氏试剂或尿糖试纸

3、结果：(用斐林试剂检测)试管内发生出现砖红色沉淀的是糖尿病患者的尿液，未出现砖红色沉淀的是正常人的尿液。

4、分析：因为糖尿病患者的尿液中含有还原糖，与斐林试剂发生反应产生砖红色沉淀，而正常人尿液中无还原糖，所以没有发生反应。

2、脂肪的检测

(1)材料的选取：含脂肪量越高的组织越好，如花生的子叶。

(2)步骤： 制作切片(切片越薄越好)将最薄的花生切片放在载玻片中央

↓

染色(滴苏丹Ⅲ染液2～3滴切片上→2～3min后吸去染液→滴体积分数50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精)

↓

制作装片(滴1～2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片)

↓

镜检鉴定(显微镜对光→低倍镜观察→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒)

3、蛋白质的检测

(1)试剂：双缩脲试剂(A液：0.1g/mL的NaOH溶液，B液：0.01g/mL的CuSO4溶液)

(2)步骤：试管中加样液2mL→加双缩脲试剂A液1mL，摇匀→加双缩尿试剂B液4滴，摇匀→观察颜色变化(紫色) 考点提示：

(1)常见还原性糖与非还原性糖有哪些?

葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖;淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖。

(2 )还原性糖植物组织取材条件?

含糖量较高、颜色为白色或近于白色，如：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。

(3)研磨中为何要加石英砂?不加石英砂对实验有何影响?

加石英砂是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜色变化不明显。

(4)斐林试剂甲、乙两液的使用方法?混合的目的?为何要现混现用?

混合后使用;产生氢氧化铜;氢氧化铜不稳定。

(5)还原性糖中加入斐林试剂后，溶液颜色变化的顺序为： 浅蓝色 棕色 砖红色

(6)花生种子切片为何要薄? 只有很薄的切片，才能透光，而用于显微镜的观察。

(7)转动细准焦螺旋时，若花生切片的细胞总有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么?

切片的厚薄不均匀。

(8)脂肪鉴定中乙醇作用? 洗去浮色。

(9)双缩脲试剂A、B两液是否混合后用?先加A液的目的。怎样通过对比看颜色变化?

不能混合;先加A液的目的是使溶液呈碱性;先留出一些大豆组织样液做对比。

实验三 观察叶绿体和细胞质流动

1、材料：新鲜藓类叶、黑藻叶或菠菜叶，口腔上皮细胞临时装片

2、原理：叶绿体在显微镜下观察，绿色,球形或椭球形。

用健那绿染液染色后的口腔上皮细胞中线粒体成蓝绿色,细胞质接近无色。

知识概要：

取材 制片 低倍观察 高倍观察

考点提示：

(1)为什么可直接取用藓类的小叶，而不能直接取用菠菜叶?

因为藓类的小叶很薄，只有一层细胞组成，而菠菜叶由很多层细胞构成。

(2)取用菠菜叶的下表皮时，为何要稍带些叶肉?

表皮细胞除保卫细胞外，一般不含叶绿体，而叶肉细胞含较多的叶绿体。

(3)怎样加快黑藻细胞质的流动速度?最适温度是多少?

进行光照、提高水温、切伤部分叶片;25℃左右。

(4)对黑藻什么部位的细胞观察，所观察到的细胞质流动的现象最明显?

叶脉附近的细胞。

(5)若视野中某细胞中细胞质的流动方向为顺时针，则在装片中该细胞的细胞质的实际流动方向是怎样的?

仍为顺时针。

(6)是否一般细胞的细胞质不流动，只有黑藻等少数植物的细胞质才流动?

否，活细胞的细胞质都是流动的。

(7)若观察植物根毛细胞细胞质的流动，则对显微镜的视野亮度应如何调节?

视野应适当调暗一些，可用反光镜的平面镜来采光或缩小光圈。

(8)在强光照射下，叶绿体的向光面有何变化?叶绿体的受光面积较小有一面面向光源。

实验四 观察有丝分裂

1、材料：洋葱根尖(葱，蒜)

2、步骤：

(一)洋葱根尖的培养

(二)装片的制作

制作流程：解离→漂洗→染色→制片

1. 解离: 药液: 质量分数为15%的盐酸,体积分数为95%的酒精(1 : 1混合液). 时间: 3~5min .目的: 使组织中的细胞相互分离开来.

2. 漂洗: 用清水漂洗约10min. 目的: 洗去药液,防止解离过度,并有利于染色.

3. 染色: 用质量浓度为0.01g / mL或0.02g / mL的龙胆紫溶液(或醋酸洋红液)染色3~ 5min 目的: 使染色体着色,利于观察.

4. 制片: 将根尖放在载玻片上,加一滴清水,并用镊子把根尖弄碎,盖上盖玻片,在盖玻片上再加一片载玻片. 然后用拇指轻轻地按压载玻片. 目的: 使细胞分散开来,有利于观察.

(三)观察

1、先在低倍镜下找到根尖分生区细胞：细胞呈正方形，排列紧密,有的细胞正在分裂。

2、换高倍镜下观察：分裂中期→分裂前、后、末期→分裂间期。(注意各时期细胞内染色体形态和分布的特点)。其中，处于分裂间期的细胞数目最多。

考点提示：

(1)培养根尖时，为何要经常换水?

增加水中的氧气，防止根进行无氧呼吸造成根的腐烂。

(2)培养根尖时，应选用老洋葱还是新洋葱?为什么?

应选用旧洋葱，因为新洋葱尚在休眠，不易生根。

(3)为何每条根只能用根尖?取根尖的最佳时间是何时?为何?

因为根尖分生区的细胞能进行有丝分裂;上午10时到下午2时;因为此时细胞分裂活跃。

(4)解离和压片的目的分别是什么?压片时为何要再加一块载玻片?

解离是为了使细胞相互分离开来，压片是为了使细胞相互分散开来;再加一块载玻片是为了受力均匀，防止盖玻片被压破。

(5)若所观察的组织细胞大多是破碎而不完整的，其原因是什么?

压片时用力过大。

(6)解离过程中盐酸的作用是什么?丙酮可代替吗?

分解和溶解细胞间质;不能，而硝酸可代替。

(7)为何要漂洗?

洗去盐酸便于染色。

(8)细胞中染色最深的结构是什么?

染色最深的结构是染色质或染色体。

(9)若所观察的细胞各部分全是紫色，其原因是什么?

染液浓度过大或染色时间过长。

(10)为何要找分生区?分生区的特点是什么?能用高倍物镜找分生区吗?为什么?

因为在根尖只有分生区的细胞能够进行细胞分裂;分生区的特点是：细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞处于分裂状态;不能用高倍镜找分生区，因为高倍镜所观察的实际范围很小，难以发现分生区。

(11)分生区细胞中，什么时期的细胞最多?为什么?

间期;因为在细胞周期中，间期时间最长。

(12)所观察的细胞能从中期变化到后期吗?为什么?

不能，因为所观察的细胞都是停留在某一时期的死细胞。

(13)观察洋葱表皮细胞能否看到染色体?为什么?

不能，因为洋葱表皮细胞一般不分裂。

(14)若观察时不能看到染色体，其原因是什么?

没有找到分生区细胞;没有找到处于分裂期的细胞;染液过稀;染色时间过短。

实验五 比较酶和Fe3+的催化效率

考点提示：

(1)为何要选新鲜的肝脏?

因为在不新鲜的肝脏中，过氧化氢酶的活性会由于细菌的破坏而降低。

(2)该实验中所用试管应选较粗的还是较细的?为什么?

应选用较粗的，因为在较细的试管中容易形成大量的气泡，而影响卫生香的复燃。

(3)为何要选动物的肝脏组织来做实验，其他动植物的组织的研磨液能替代吗?

因为肝脏组织中过氧化氢酶含量较丰富;其它动植物组织也含有少量的过氧化氢酶，所以能够替代。

(4)相同质量的块状肝脏和肝脏研磨液，哪一个催化效果好?为什么?

研磨液效果好;因为它增加过氧化氢酶与过氧化氢的接触面积。

(5)滴入肝脏研磨液和氯化铁溶液时，可否共用下个吸管?为什么?

不可共用，防止过氧化氢酶与氯化铁混合，而影响实验效果。

实验六 色素的提取和分离

1、原理：叶绿体中的色素能溶解在有机溶剂丙酮或无水乙醇--提取色素

各色素在层析液中的溶解度不同,随层析液在滤纸上扩散速度不同--分离色素

2、步骤：

(1)提取色素

研磨

(2)制备滤纸条

(3)画滤液细线：均匀，直，细，重复若干次

(4)分离色素：不能让滤液细线触及层析液

(5)观察和记录: 结果滤纸条上从上到下依次为:橙黄色(胡萝卜素)、黄色(叶黄素)、蓝绿色(叶绿素a)、黄绿色(叶绿素b). 考点提示：

(1)对叶片的要求?为何要去掉叶柄和粗的时脉?

绿色、最好是深绿色。因为叶柄和叶脉中所含色素很少。

(2)二氧化硅的作用?不加二氧化硅对实验有何影响?

为了使研磨充分。不加二氧化硅，会使滤液和色素带的颜色变浅。

(3)丙酮的作用?它可用什么来替代?用水能替代吗?

溶解色素。它可用酒精等有机溶剂来代替，但不能用水来代替，因为色素不溶于水。

(4)碳酸钙的作用?不加碳酸钙对实验有何影响?

保护色素，防止在研磨时叶绿体中的色素受到破坏。不加碳酸钙，滤液会变成黄绿色或褐色。

(5)研磨为何要迅速?要充分?过滤时为何用布不用滤纸? 研磨迅速，是为了防止丙酮大量挥发;只有充分研磨，才能使大量色素溶解到丙酮中来。色素不能通过滤纸，但能通过尼龙布。

(6)滤纸条为何要剪去两角? 防止两侧层析液扩散过快。

(7)为何不能用钢笔或圆珠笔画线? 因为钢笔水或圆珠笔油中含有其它色素，会影响色素的分离结果。

(8) 滤液细线为何要直?为何要重画几次?

防止色素带的重叠;增加色素量，使色素带的颜色更深一些。

(9) 滤液细线为何不能触到层析液?

防止色素溶解到层析液中。

(10)滤纸条上色素为何会分离?

由于不同的色素在层析液中的溶解度不同，因而它们随层析液在滤纸条上的扩散速度就不同。

(11)色素带最宽的是什么色素?它在层析液中的溶解度比什么色素大一些?

最宽的色素带是叶绿素a，它的溶解度比叶绿素b大一些。

(12)滤纸条上相互间距最大的是哪两种色素? 胡萝卜素和叶黄素。

(13)色素带最窄的是第几条色素带?为何?

第一条色素带，因为胡萝卜素在叶绿体的四种色素中含量最少。

实验七 观察质壁分离和复原

1、条件：细胞内外溶液浓度差，活细胞，大液泡

2、材料：紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞(具紫色大液泡)，质量浓度0.3g/mL的蔗糖溶液，清水等。

3、步骤：制作洋葱鳞片叶外表皮细胞临时装片→观察→盖玻片一侧滴蔗糖溶液,另一侧用吸水纸吸引→观察(液泡由大到小,颜色由浅变深,原生质层与细胞壁分离)→盖玻片一侧滴清水, 另一侧用吸水纸吸引→观察(质壁分离复原)

4、结论: 细胞外溶液浓度 > 细胞内溶液浓度，细胞失水 质壁分离 细胞外溶液浓度 < 细胞内溶液浓度，细胞吸水 质壁分离复原

知识概要：制片 观察 加液 观察 加水 观察

考点提示：

(1)洋葱为何要选紫色的?若紫色过淡怎么办?

紫色的洋葱有紫色的大液泡，便于观察液泡的大小变化;缩小光圈，使视野变暗些。

(2)洋葱表皮应撕还是削?为何?

表皮应撕不能削，因为削的表皮往往太厚。

(3)植物细胞为何会出现质壁分离? 动物细胞会吗?

当细胞失去水分时，其原生质层的伸缩性大于细胞壁的伸缩性;动物细胞不会发生质壁分离，因为动物细胞没有细胞壁。

(4)质壁分离时，液泡大小和颜色的变化?复原时呢?

细胞发生质壁分离时，液泡变小，紫色加深;当细胞质壁分离复原时，液泡变大，紫色变浅。

(5)若发生质壁分离后的细胞，不能发生质壁分离复原，其原因是什么?

细胞已经死亡(可能是外界溶液浓度过大，细胞失水过多或质壁分离时间过长)

(6)高倍镜使用前，装片如何移动?

若要把视野中上方的物像移到视野的正中心，则要将装片继续向上移动。若要把视野中左方的物像移到视野的正中心，则要将装片继续向左方移动，因为显微镜视野 中看到的是倒像。

(7)换高倍物镜后，怎样使物像清晰?视野明暗度会怎样变化?如何调亮?

换高倍物镜后，应调节细准焦螺旋使物像变得清晰;视野会变暗，可调大光圈或改用反光镜的凹面镜来使视野变亮。

(8)所用目镜、物镜的长度与放大倍数的关系?

目镜越长，放大倍数越小;物镜越长，放大倍数越大。

(9)物像清晰后，物镜与载玻片之间的距离和放大倍数的关系?

物镜与载玻片之间的距离越小，放大倍数越大。

(10)总放大倍数的计算方法?放大倍数具体指面积的放大倍数还是长度的放大倍数?

总放大倍数等于目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积;放大倍数是指细小物体长度或宽度的放大倍数。

(11)放大倍数与视野中细胞大小、多少、视野明暗的关系?

放大倍数越大，视野中细胞越大、数目越少、视野越暗。

(12) 更换目镜，若异物消失，则异物在目镜上;更换物镜，若异物消失，则异物在物镜上、移动载玻片，若异物移动，则异物在载玻片上。

(13)怎样利用质壁分离现象来测定植物细胞液的浓度? ①配制一系列浓度从小到大的蔗糖溶液 ②分别用以上不同浓度的溶液制成某植物细胞的临时装片 ③用显微镜观察某植物细胞是否发生质壁分离。某植物细胞液的浓度就介于不能引起质壁分离的浓度和能引起质壁分离的浓度之间。

实验八 DNA的粗提取与鉴定

考点提示：

(1)鸡血能用猪血代替吗?为什么?

不能，因为哺乳动物的红细胞中没有细胞核，不能提取DNA。

(2)鸡血中为何要加柠檬酸钠?为何要弃去鸡血细胞的上清液?

防止血液凝固;因为上清液是血浆，不含细胞和DNA。

(3)胀破细胞的方法?能用生理盐水吗?

向血细胞中加入蒸馏水，使细胞大量吸水而胀破;不能用生理盐水，因为血细胞在蒸馏水中不能吸收水分。

(4)该实验中最好应用玻璃烧杯还是塑料烧杯?为什么?

最好用塑料烧杯，因为玻璃烧杯容易吸附DNA。

(5)前后三次过滤时，所用纱布的层数分别是多少?为什么?

第一次用一层纱布，有利于核物质透过纱布进入滤液;第二次用多层纱布，能防止DNA丝状物透过纱布进入滤液;第三次用两层纱布，既有利于DNA透过纱布，又能防止其它杂质透过纱布。

(6)若实验中所得黏稠物太少，其原因是什么?

第一次加蒸馏水过少，细胞未充分胀破;第二次加蒸馏水过多或过少;第一次过滤用了多层纱布;第二次过滤用了一层纱布。

(7)两次加入蒸馏水的目的分别是什么?

第一次是为了使血细胞吸水胀破;第二次是为了降低氯化钠的浓度，有利于DNA有析出。

(8)实验中搅拌溶液时，为何总要沿一个方向搅拌?

防止DNA分子受到损伤。

(9)两次析出DNA的方法分别是什么?原理分别是什么?

第一次是加蒸馏水，降低氯化钠的浓度，促使DNA析出;第二次是加入冷酒精，因为DNA不溶于酒精溶液。

(10)三次溶解DNA的液体分别是什么?原理分别是什么?

第一次、第二次都是用浓度为2mol/L的氯化钠溶液，第三次用的是0.015mol/L(或2 mol/L)的氯化钠溶液。其原理是DNA在氯化钠中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为0.14mol/L时，DNA的溶解度最低。2mol/L的氯化钠溶液和0。015mol/L的氯化钠溶液对DNA的溶解度都比较高。

(11)鉴定DNA时为何要用两支试管?其现象分别是什么?

其中不加DNA的试管起对照作用。该试管溶液不变色，另一支加有DNA的试管溶液变蓝色。

实验九 探究酵母菌的呼吸方式

1、原理: 酵母菌在有氧条件下进行有氧呼吸,产生二氧化碳和水：

C6H12O6 + 6O2 + 6H2O6→CO2 + 12H2O + 能量

在无氧条件下进行无氧呼吸,产生酒精和少量二氧化碳：

C6H12O6→ 2C2H5OH + 2CO2 + 少量能量

2、装置：(见课本)

3、检测：(1)检测CO2的产生：使澄清石灰水变浑浊，或使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄。

(2)检测酒精的产生：橙色的重铬酸钾溶液，在酸性条件下与酒精发生反应，变成灰绿色。

实验十 观察细胞的减数分裂

1、目的要求：通过观察蝗虫精母细胞减数分裂固定装片，识别减数分裂不同阶段的染色体的形态、位置和数目，加深对减数分裂过程的理解。

2、材料用具：蝗虫精母细胞减数分裂固定装片，显微镜。

3、方法步骤：

(1)在低倍镜下观察蝗虫精母细胞减数分裂固定装片，识别初级精母细胞、次级精母细胞和精细胞。

(2)先在低倍镜下依次找到减数第一次分裂中期、后期和减数第二次分裂中期、后期的细胞，再在高倍镜下仔细观察染色体的形态、位置和数目。

4、讨论：(1)如何判断视野中的一个细胞是处于减数第一次分裂还是减数第二次分裂?

(2)减数第一次分裂与减数第二次分裂相比，中期细胞中的染色体的不同点是什么?末期呢?

实验十一 低温诱导染色体加倍

1、原理：用低温处理植物分生组织细胞，能够抑制纺锤体的形成，以致影响染色体被拉向两极，细胞也不能分裂成两个子细胞，于是，植物细胞染色体数目发生变化。

2、方法步骤：

(1)洋葱长出约1cm左右的不定根时，放入冰箱的低温室内(4℃)，诱导培养36h。

(2)剪取诱导处理的根尖约0.5~1cm，放入卡诺氏液中浸泡0.5~1 h，以固定细胞的形态，然后用体积分数为95%的酒精冲洗2次。

(3)制作装片：解离→漂洗→染色→制片

(4)观察，比较:视野中既有正常的二倍体细胞,也有染色体数目发生改变的细胞.

3、讨论：秋水仙素与低温都能诱导染色体数目加倍，这两种方法在原理上有什么相似之处?

实验十二 调查常见的人类遗传病

1、 要求：调查的群体应足够大;选取群体中发病率较高的单基因遗传病。如红绿色盲、白化病、高度近视(600度以上)等.

2、 方法: 分组调查,汇总数据,统一计算.

3、计算公式：某种遗传病的发病率=×100%

4、讨论: 所调查的遗传病的遗传方式, 发病率是否与有关资料相符, 分析原因.

实验十三 探究植物生长调节剂对扦插枝条生根的作用

1、常用的生长素类似物:NAA(萘乙酸), 2,4-D, IPA(苯乙酸). IBA(吲哚丁酸)等

2、方法：

①浸泡法：把插条的基部浸泡在配置好的溶液中，深约3cm，处理几小时或一天。处理完毕就可以扦插了。这种处理方法要求溶液的浓度较低，并且最好是在遮荫和空气湿度较高的地方进行处理。

②沾蘸法：把插条的基部在浓度较高的药液中蘸一下(约5s)，深约1.5cm即可。

3、预实验：先设计一组浓度梯度较大的实验进行探索,在此基础上设计细致的实验.

4、实验设计的几项原则: ①单一变量原则(只有溶液的浓度不同);②等量原则(控制无关变量,即除溶液的浓度不同外,其他条件都相同);③重复原则(每一浓度处理3~5段枝条) ;④对照原则(相互对照、空白对照);⑤科学性原则

实验十四 探究培养液中酵母菌数量的动态变化

1、培养酵母菌(温度、氧气、培养液)：可用液体培养基培养

2、计数：血球计数板(2mm×2mm方格,培养液厚0.1mm)

3、推导计算

4、讨论：根据7天所统计的酵母菌种群数量画出酵母菌种群数量的增长曲线;推测影响影响酵母菌种群数量变化的因素。

实验十五 土壤中动物类群丰富度的研究

1、丰富度的统计方法通常有两种：记名计算法和目测估计法

记名计算法：指在一定面积的样地中，直接数出各种群的个体数目，这一般用于个体较大，种群数量有限的群落。

目测估计法：按预先确定的多度等级来估计单位面积上个体数量的多少。等级的划分和表示方法有："非常多、多、较多、较少、少、很少"等等。

2、设计数据收集和统计表，分析所搜集的数据。

实验十六 种群密度的取样调查

考点提示：

(1)什么是种群密度的取样调查法?

在被调查种群的生存环境内，随机选取若干个样方，以所有样方种群密度的平均值作为该种群的种群密度。

(2)为了便于调查工作的进行，在选择调查对象时，一般应选单子叶植物，还是双子叶植物?为什么?

一般应选双子叶植物，因为双子叶植物的数量便于统计。

(3)在样方中统计植物数目时，若有植物正好长在边线上，应如何统计?

只计算该样方相邻的两条边上的植物的数目。

(4)在某地域中，第一次捕获某种动物M只，标志后放回原处。第二次捕获N只，其中含标志个体Y只，求该地域中该种动物的总数。 MN/Y

(5)应用上述标志重捕法的条件有哪些?①标志个体在整个调查种群中均匀分布，标志个体和未标志个体都有同样被捕的机会。②调查期中，没有迁入或迁出。③没有新的出生或死亡。

实验十：胡萝卜的组织培养

一、实验目的：

胡萝卜是细胞和组织培养中常用的经典材料，是教学实验的良好材料。通过本实验实训，要求学生熟悉胡萝卜离体根培养的基本方法和步骤，掌握愈伤组织诱导的基本技能。

二、实验原理：

植物体的茎，根，叶细胞一般都具有全能性，在一定条件的营养和激素等条件下， 可以脱分化形成愈伤组织。将愈伤组织转接到含有不同激素成分的培养基上，就可以诱导其再分化生成胚状体或丛芽，进而发育成完整的小植株。植物组织培养的全过程，证明了分化的植物细胞，仍具有形成完整植株所需要的全部基因。

三、实验用具：超净台 解剖刀 刮皮刀 不锈钢打孔器 培养皿 温箱

四、方法步骤：

1. 将胡萝卜用自来水冲洗干净，用刮皮刀除去表皮1-2mm，横切成大约10mm厚的切片。以下步骤均在无菌条件下进行。

2. 胡萝卜片经70%乙醇处理30秒钟后，用无菌水冲洗一遍，再用、2%的次氯酸钠溶液浸泡10分钟，无菌水冲洗3~4次。

3. 将胡萝卜片放入培养皿中，一手用镊子固定胡萝卜片，一手用打孔器垂直打孔，每个小孔打在靠近维管形成层的区域，务必打穿组织。然后从组织片中抽出打孔器，将胡萝卜组织片收集在装有无菌水的培养皿。重复打孔步骤，直至收集到足够数量的组织圆片。

4. 用镊子取出组织圆片，放入培养皿中，用刀片将组织圆片切成2mm长的小块，放入装有无菌水的培养皿中。在整个操作过程中镊子和解剖刀要多次火焰消毒，冷却后再使用。

5、将胡萝卜组织小块放到灭过菌的滤纸上，吸干水分后接种到培养基表面。注意接种时培养瓶要有一定倾斜度，接种过程中镊子不要直接在培养基上方完成，以减少污染机会。

6、将培养物一部分置于25。C温箱中暗培养，另一部分到光照培养室中进行培养，以比较光照和暗培养对愈伤组织诱导的反应。

第四篇：生物安全培训合格证、实验室生物安全承诺书

于田县人民院生物安全培训合格证

兹证明 同志 2015年10月12日参加检验科生物安全培训合格，特颁发此证。

于田县人民医院

病原微生物实验室生物安全责任承诺书

于田县卫生与计划生育委员会：

本单位申请病原微生物实验室备案，对于卫生行政部门告知的内容已清楚、全面了解，将认真履行告知的义务，接受卫生行政部门的监督管理，并郑重作出如下承诺：

1、本单位所报备案申请材料中所提交的所有材料是准确的、真实的、有效的。

2、实验室从事病原微生物菌(毒)种、样本有关的检测、诊断、教学、科研等活动，自觉遵守《中华人民共和国传染病防治法》、《病原微生物实验室生物安全管理条例》等实验室生物安全法律法规及规

教学、科研等活动，自觉遵守《中华人民共和国传染病防治法》、《病原微生物实验室生物安全管理条例》等实验室生物安全法律法规及规章制度。

3、建立健全法定代表人责任制，实施病原微生物实验室生物安全管理制度，实行实验室操作人员培训上岗制度。

4、按照国家有关规定从事病原微生物菌(毒)种、样本有关的检测、诊断、教学、科研等活动，不擅自改变、增加活动范围。

本单位保证：如违反了国家有关病原微生物实验室生物安全管理的法律、法规、规章、标准、规范、规范性文件的规定，将承担由此产生的法律责任。

单位法人(签章)：

承

诺

日期：

年

月

实验室生物安全承诺书

根据国家相关法律法规的要求和于田县人民医院(生物安全管理委员会)制定的有关病原微生物实验室生物安全管理的一系列部门规章制度的规定，现将相关事宜告知如下：

1. 本人已熟读了本实验室生物安全手册等相关受控文件，意识到本实验室存在病原微生物获得性感染的风险和危害，对所读内容无任何疑义，对部门告知单内容已完全清楚和全面了解，并能认真履行告知的义务，全面接受各级卫生行政部门的监督管理。

2. 在实验室病原微生物检测工作中，自觉遵守《传染病防治法》《病原微生物实验室生物安全管理条例》《实验室生物安全通用要求》《病原微生物实验室生物安全管理条例》《实验室生物安全通用要求》《病原微生物实验室生物安全环境管理条例》《人间传染的病原微生物名录》等相关的规章、规范性文件、技术标准和规范的规定及病原微生物实验室管理的要求。

3. 根据核准的内容从事病原微生物检测工作，不擅自改变病原微生物检测项目范围;不更改病原微生物技术操作流程，严格规范执行各种标准化操作程序，认真如实填报各项实验记录，认真履行病原微生物实验室消毒和灭菌规则及规范。

4. 有权拒绝违反实验室生物安全的一切操作，对实验室存在的生物安全等所有缺陷或隐患有权向生物安全责任人或生物安全主管进行书面报告并自留有效文件备查。同时有义务完成上级生物安全管理专业委员会交办的其他相关任务。

5. 本人已知在实验室工作，有可能感染《人间传染的病原微生物名录》确定的已知的各种病原微生物，如病毒性肝炎、艾滋病、梅毒等感染性疾病及由于医学学科发展的局限性等尚未了解的其他病原微生物的感染。

6. 本人保证：如违反了国家有关病原微生物实验室生物安全管理的法律、法规、规章、标准、规范、规范性文件的规定，本人将承担由此产生的所有法律责任和民事责任。

7. 对于上述内容和有关实验室安全的其他相关文件内容，本人已被详细告知并能全面遵章执行，本人愿意亲笔签署“知情并同意”意见，同时，自签名之日起将履行病原微生物实验室生物安全管理的所有法律责任和民事责任及其义务。

8. 承诺书签字生效后一式两份，由科室和个人保管以备查询 本人已知情并同意

部 门：

实验室责任人：

成 员：

日

期：

第五篇：实验室生物安全

一、实验室安全管理制度和流程

1. 检验科主任为实验室安全负责人。

2. 有实验室安全管理制度和流程。严格规定各个场所、各工作流程及不同工作性质人员的安全准则。(附件1) 3. 保存完整的安全记录。(附件2)

4. 开展安全制度与流程管理培训，相关人员知晓本岗位的履职要求。 5. 各实验科室设置安全员，负责各个场所的安全。 6. 演习活动需保存完整的各项安全相关活动记录。

7. 严格执行安全规程，定期进行安全检查，保障实验室安全。

二、进行生物安全分区并合理安排工作流程以避免交叉污染

1. 实验室生物安全分区得合理，有明确的实验室生物安全等级标志。 2. 合理设计工作流程以避免交叉污染。

3. 进入分子生物学实验室、HIV初筛实验室需通过相关门禁识别装置后方可进入。

三、配置充分的安全防护设施

1. 根据工作人员的不同工作性质，按照行业规范进行充分的个人防护。

2. 配备洗眼器、冲淋装置及其他急救设备及耗材(碘伏、酒精、纱布、眼药水等)，并保证以上设施可正常工作。

3. 设立适当的警示标识，对生物安全、防火防爆安全、化学安全等做出充分警示。(附件3)(注：实验室风险告知标识，标本、人员走线图)

4. 如开展放射免疫分析和其他使用放射性同位素的检测，保证使用放射性同位素时患者和工作人员的安全性。

5. 对相关人员进行培训，保存完整的培训记录。

6. 实验室出口处设有专用手部消毒设备。

7. 实验室安全防护要到位，有实验室工作人员健康档案管理。(注：档案管理需专人负责)

三、消防安全保障

1. 建立易燃、易爆物品的储存使用制度。(附件4) 2. 设置专门的储藏室、储藏柜。

3. 指定专门人员负责实验室的消防安全。 4. 定期检查灭火器的有效期。 5. 保持安全通道畅通。

6. 定期检查各种电器设备，电路是否存在安全隐患。 7. 对消防安全检查发现的问题及时整改，保存整改意见。

8. 有关人员需掌握消防安全知识与基本技能，进行消防演习并持续改进，保存演练记录。

四、制订各种传染病职业暴露后的应急措施，并详细记录处理过程(附件5)

1. 制订各种传染病职业暴露后应急预案。

2. 相关人员知晓职业暴露的应急措施与处理流程，并对实验室工作人员进行暴露的培训及演练，保存完整的相关记录。

3. 有职业暴露处置登记及随访记录，根据职业暴露的案例分析改进职业暴露管理。

五、制定针对不同情况的消毒措施，并保留各种消毒记录。定期监控各种消毒用品的有效性

1. 制订针对不同情况的消毒措施并实施。(附件6) 2. 定期监控各种消毒用品的有效性。 3. 标本溢洒处理流程。(附件7)

4. 相关人员掌握消毒方法与消毒用品的使用。 5. 保留各种消毒记录，记录完整。(附件8)

6. 主管部门定期检查、分析、反馈、整改，定期对消毒用品的有效性进行监测。

六、建立微生物菌种、毒株的管理规定，并安排专人进行监督(附件9) 1. 建立微生物菌种、毒株的管理规定与流程。 2. 微生物实验室有专人负责菌(毒)种管理。 3. 建立相应应急预案。

4. 主管部门有监督记录，改进措施。

七、实验室废弃物、废水的处置符合要求

1. 制定实验室废弃物、废水的处理流程并落实。(附件10)

2. 有明确的责任人，定期检查整改，以保证对人员及环境的危害降至最低。 3. 主管部门有监督记录，改进措施。

4. 实验室废弃物、废水处理登记资料要完整。(附件11)

八、建立化学危险品管理制度(附件4，附件12) 1. 建立化学危险品管理制度。

2. 建立化学危险品清单和安全数据表。

3. 指定专门的储存地点，专人管理，对使用情况详细记录。 4. 有主管部门监管记录。